暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)转录因子CsATF1互作蛋白的筛选与鉴定

【作者】 宋苗； 方思齐； 何其光； 李潇； 刘文波； 张宇； 林春花； 缪卫国；

【机构】 海南大学植物保护学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室；

【摘要】 转录因子(transcription factors)可以和目的基因特定DNA序列结合或与相关蛋白相互作用来激活或抑制基因的转录,从而调节目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达,进而调控生物体的生理代谢和生长。本项目组前期克隆获得暹罗炭疽菌(Colletotrichum siamense)的一个bZip转录因子CsATF1,并分析显示该转录因子CsATF1参与吡咯类药剂敏感性的调控功能,为进一步了解该转录因子的作用机制,采用酵母双杂交的方法对其互作蛋白进行了筛选和鉴定。本研究使用双酶切的方法构建了诱饵载体pGBKT7-CsATF1,自激活和毒性验证显示诱饵蛋白无自激活能力、无毒性。将含诱饵载体的Y2HGold菌株与暹罗炭疽菌cDNA酵母文库杂交,于SD/-Trp-Leu-His-Ade缺陷培养基平板上筛选3次后得到94个阳性克隆。以粗提取的酵母DNA为模板,对上述94个单克隆进行PCR验证,结果显示有49个单克隆能够扩增到片段。排除重复序列后,在NCBI上进行比对分析,获得12个候选互作蛋白。经比对分析,它们分别为线粒体缺氧反应区蛋白、细胞壁蛋白PhiA、疏水蛋白、锌乙醇脱氢酶、发育调控的MAPK相互作用蛋白、甲基转移酶以及5个假定蛋白等。进一步通过免疫共沉淀技术,证实了转录因子CsATF1能够与线粒体缺氧反应区蛋白发生体内互作。本研究结果为进一步研究CsATF1调控炭疽菌生物胁迫应答机制奠定了基础。更多还原