斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型DNA复制原点在家蚕细胞中的功能分析

【作者】 刘惠芬； 衣葵花； 刘文光； 王安皆； 张志芳； 李云芝； 郭光；

【机构】 山东省蚕业研究所； 中国农业科学院生物技术研究所；

【摘要】 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltNPVⅡ)基因组DNA含有7个同源重复区(hr)。采用脂质体介导转染法和实时荧光定量PCR对7个hr在异源病毒(BmNPV)感染的家蚕BmN细胞中的复制原点功能进行分析。结果表明,SpltNPVⅡhrs在非宿主家蚕Bm N细胞中均具有复制起始原点功能,但其复制能力不同,hr4复制能力最强,达4.05×105拷贝/μg DNA,hr5复制能力最弱,仅为2.21×104拷贝/μg DNA。采用脂质体介导转染法和瞬时表达实验对7个hr在异源病毒(BmNPV)感染的BmN细胞中增强异源ie1启动子转录活性的功能进行分析。结果表明,除hr5外,SpltNPVⅡhrs均能增强BmNPVie1启动子的转录活性,其中hr1、hr4和hr7增强效率较高,为对照的30～40倍。另外,SpltNPVⅡhrs增强异源ie1基因启动子转录活性的效率与其所含的正反向重复序列、回文序列以及与复制相关的基序等特征结构的数目存在显著的正相关。更多还原