食管鳞癌细胞来源外泌体对巨噬细胞极化的影响

【作者】 寿雨薇； 王晓倩； 陈超； 王帅元； 舒姣； 杨琛擘； 梁英豪； 陈奎生；

【机构】 郑州大学第一附属医院；

【摘要】 目的:探讨食管鳞癌细胞来源外泌体对巨噬细胞极化的影响方法:1.采用ExoQuick-TC法从食管鳞癌细胞上清液中提取外泌体,电子显微镜观察外泌体的形态,纳米颗粒追踪分析仪分析其直径,western blot检测外泌体特异性表面标志物CD63,CD81的表达,对外泌体进行鉴定。2.将THP-1细胞(人髓系白血病单核细胞)与PMA共孵育,诱导其成为巨噬细胞。用PKH26荧光标记食管鳞癌细胞来源外泌体,并将其与巨噬细胞共培养。24h后用DAPI标记巨噬细胞的细胞核,然后在激光共聚焦显微镜下观察到外泌体被巨噬细胞摄取情况。3.细胞分组培养:巨噬细胞单独培养组,食管鳞癌细胞来源外泌体与巨噬细胞共培养组。通过流式细胞仪分析两组巨噬细胞的M2型巨噬细胞表面标记物CD206的表达情况,应用qRT-PCR检测两组巨噬细胞中M2型巨噬细胞标记物(CD206,精氨酸酶-1,IL10和CD163)的表达情况,对两组巨噬细胞的表型进行鉴定。结果:1.电子显微镜下可以清楚地看到呈典型的脂质双层膜碟状结构的外泌体,直径约为50-150nm。CD63和CD81在ESCC细胞的外泌体中高表达(P<0.01)。2.共聚焦显微镜下可见PKH-26红色标记的外泌体被巨噬细胞摄取。3.流式细胞术结果表明,与对照组单纯的巨噬细胞(5.64%)相比,外泌体孵育的巨噬细胞中CD206+巨噬细胞的比例明显增加(22%)。qRT-PCR结果表明,与对照组单纯的巨噬细胞相比,外泌体孵育的巨噬细胞中M2型巨噬细胞标记物(CD206,精氨酸酶-1,IL10和CD163)的表达显著增加。这些结果提示食管鳞癌外泌体可以诱导巨噬细胞向M2型极化(P<0.01)。结论:食管鳞癌细胞来源外泌体可被巨噬细胞摄取并诱导巨噬细胞向M2型极化。更多还原