绵羊外周血中T淋巴细胞基础免疫指标检测研究

【作者】 杨继辉； 吕咏雪； 吴长有； 赵巍；

【机构】 宁夏医科大学； 宁夏常见传染病防治重点实验室； 中山大学中山医学院免疫学研究所；

【摘要】 背景:绵羊不仅是重要的牲畜品种,也是畜牧兽医研究中重要的大型动物模型。了解它们的基本免疫指标对于畜牧相关疾病及疫苗的研究具有重要意义。目的:通过对外周血T淋巴细胞基础免疫指标的检测,为绵羊相关的免疫学研究提供有意义的参考。方法:随机选取宁夏本地36只4-6月龄雌性绵羊,颈静脉采集外周血(肝素钠抗凝),通过外周血淋巴细胞分离液分离PBMC,对T淋巴细胞相关免疫指标进行检测。流式细胞仪检测PBMC中CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的表达。PBMC中加入多克隆刺激剂ConA (5μg/ml)或PMA (20ng/ml)/lono (1μg/ml),培养24h后,利用ELISA和ELISpot分别检测细胞产生IFN-γ和IL-4等细胞因子情况。PBMC加入PMA (20ng/ml)/lono (1μg/ml)/BFA (1μg/ml),培养4h后,利用流式细胞术检测IFN-γ和IL-4等细胞因子的表达情况。PBMC经多克隆刺激剂ConA刺激培养3、4、5天,通过CFSE方法检测在不同刺激时间PBMC及CD4~+/CD8~+T淋巴细胞的增殖。结果:36只绵羊PBMC中CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞表达水平分别为18.7±4.21%和8.7±3.65%,CD4/CD8~+T淋巴细胞比值为2.4±0.79。ELISA与ELISpot检测发现,经两种多克隆刺激剂刺激后,PBMC产生了高水平的IFN-γ、IL-4及IL-17A,且PMA/lonomycin刺激PBMC产生细胞因子的能力显著高于ConA。流式细胞术检测PMA/lonomycin刺激PBMC,CD8~+T淋巴细胞中IFN-γ(51.49±11.54%)显著高于CD4~+T淋巴细胞中IFN-γ(14.29±3.26%)(p<0.0001),CD4~+T淋巴细胞中IL-4 (16.13±6.81%)高于CD8~+T淋巴细胞中IL-4 (1.84±1.33%)(p<0.001),IL-17A在CD4~+T淋巴细胞(2.83±0.98%)与CD8~+T淋巴细胞(1.34±0.67%)相比无差异。淋巴细胞、CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的增殖比例从第3天到第5天持续增加,但相同刺激时间下,三群细胞的增殖没有统计学差异。结论:了解绵羊的基本免疫指标,特别是T淋巴细胞基础免疫指标对于研究细胞免疫具有重要意义,同时为畜牧兽医学研究提供一定的理论参考。更多还原