miR-222-3p通过靶向PTEN/Akt促进肺癌A549顺铂耐药

【作者】 张征峥； 张子明； 宋淑霞；

【机构】 河北医科大学；

【摘要】 目的:非小细胞肺癌是肺癌最常见的病理类型,铂类化疗药是其治疗的一线药物。但随着治疗周期的进行,肿瘤出现的耐药成为化疗失败的重要原因。探索铂类化疗药耐药产生的机制,对于改善非小细胞肺癌耐药、提高患者存活率意义重大。方法:以人肺腺癌细胞株A549细胞为模型,同时建立耐药细胞株A549/DDP,前期实验观察到,体外诱导的顺铂耐药的人肺腺癌细胞株A549/DDP高表达miR-222-3p,为进一步探讨miR-222-3p在化疗耐药中的作用,本研究建立了miR-222-3p高表达细胞株A-222和敲低株sh-222/A,以及A-222的敲低株sh-222/A-222,比较A549、A-222、sh-222/A-222与sh-222/A各组IC50值,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验、细胞划痕实验检测细胞迁移率,Western blot检测细胞株N-Cadherin、E-Cadherin、Vimentin表达,以及PTEN、P-AKT、AKT表达,构建含靶基因PTEN的3’-UTR野生型或突变型双荧光素酶报告基因质粒,利用双荧光素酶法检测分析miR-222-3p的靶基因。结果:miR-222-3p高表达细胞株A-222对顺铂的IC50值与对照组相比明显升高,经DDP处理后,低表达miR-222-3p的细胞株细胞凋亡率明显高于miR-222-3p高表达细胞株。划痕实验结果显示,高表达miR-222-3p细胞株横向迁移率明显高于其对照细胞株。Transwell实验结果显示,高表达miR-222-3p的细胞株纵向迁移的细胞数明显多于其对照细胞株。Western Blot结果表明,miR-222-3p高表达的细胞N-cadherin升高,而E-cadherin和vimentin改变无统计学差异。Western Blot结果进一步表明,miR-222-3p高表达的细胞中PTEN蛋白表达明显下降,p-AKT蛋白显著升高。双荧光素酶报告基因实验显示,在转入miR-222-3p mimic后,细胞中野生型PTEN 3’-UTR的荧光素酶活性较对照组明显降低,而突变型PTEN 3’-UTR无显著影响。结论:miR-222-3p高表达可促进人肺腺癌A549细胞株对顺铂的耐受,miR-222-3p可通过PTEN/AKT途径促进顺铂耐药。更多还原