HLA-A2限制性黑色素瘤抗原(gp100)特异性TCR的筛选及功能研究

【作者】 陈缘； 卢丹； 高福； 谭曙光；

【机构】 广西医科大学； 中国科学院存济医学院； 中国科学院微生物研究所；

【摘要】 黑色素瘤是最常见的皮下恶性肿瘤之一,在全球范围内的发病率一直处于上升趋势。细胞毒性T细胞可以通过识别人类白细胞抗原(pHLA)在细胞表面呈递的肿瘤衍生肽来介导针对自体黑色素瘤细胞的特异性反应。目前,TCR-T细胞(T-cell receptor engineered T cell,TCR-T cell)疗法已在黑色素瘤的临床研究中得到广泛开展,黑色素瘤谱系特异性抗原gp100 (melanocytes lineage-specific antigen,gp100)以其在黑色素瘤患者肿瘤中表达的广谱性成为关注热点,由于TCR-T细胞疗法对HLA分子有依赖性,因此全球最广谱的HLA分型一HLA-A2的限制型被我们选定为研究的靶标。本研究旨在HLA-A2转基因小鼠筛选gp100特异性T细胞,并对其TCR进行功能研究,为gp100抗原为基础的肿瘤细胞治疗提供重要参考。本课题通过对HLA-A2转基因小鼠三次皮下免疫多肽gp100154-162,第4周取小鼠脾脏进行酶连免疫斑点实验(ELISPOT)进行初步筛选。其后,通过流式细胞术从ELISPOT阳性细胞中分选出HLA-A2/gp100154-162四聚体阳性的单个CD8~+T细胞,并进行单个细胞TCRα链TCRβ链的测序。在TCR构建成功后,我们通过流式细胞术在293T细胞水平上进行了TCR表达和特异性的检测,结果表明所筛选的TCR能够特异性结合HLA-A2/gp100154-162四聚体。目前,我们已经成功筛选到了一个可以结合HLA-A2/gp100154-162四聚体的TCR。在进一步的研究中,我们将进行TCR慢病毒的包装,在细胞系和人PBMC细胞水平上进行功能验证。此外,我们希望能与其他靶向黑色素瘤抗原的TCR联用,对筛选出的TCR进行改造以提高靶向效果和扩展受众。另一方面,我们会继续筛选其他HLA-A2限制性的gp100特异性TCR,作为黑色素瘤TCR-T细胞治疗的候选药物。更多还原