免疫模拟脂磷壁酸(LTA)的合成肽可诱导BALB/c鼠体内产生记忆性B淋巴细胞

【作者】 刘北一； 易夏玉； 侯晓睿； 朱平；

【机构】 南方医科大学基础医学院； 芜湖市第一人民医院检验科；

【摘要】 研究背景:脂磷壁酸（lipoteichoic acid,LTA）是金葡菌细胞壁的保守结构,参与细菌的分裂、黏附等重要生物学功能。由于LTA属于胸腺非依赖性抗原,不易诱导免疫记忆,因此常规不作为疫苗候选。在前期工作中我们利用噬菌体展示技术获得模拟LTA的表位序列GHKEDRQWCQHS （专利号:ZL 2016 1 0832921.3）并以此合成四分支多价抗原肽（命名为MAP2-3）。MAP2-3免疫后保护小鼠抵御金葡菌系统性感染;在菌血症模型、皮肤坏死模型和肺炎模型中,过继转移抗MAP2-3抗体降低小鼠组织中的细菌残存量。目的:初步探讨LTA模拟肽MAP2-3诱导免疫记忆的机制。方法:MAP2-3免疫BALB/c鼠,共4次。末次免疫一个月后腹腔注射热灭活金葡菌,7天后取小鼠脾脏、淋巴结、股骨和胫骨,分别制备单细胞悬液。ELISPOT检测免疫鼠体内抗体生成细胞的频数,流式细胞术检测各组织中浆细胞、记忆性B细胞及记忆性T细胞的比例。结果:ELISPOT结果显示MAP2-3免疫鼠脾细胞中能特异性识别LTA、可分泌IgG的抗体分泌细胞频率（30.36±6.07/10⁶个细胞）显著高于对照肽免疫组（1.33±0.79/10⁶个细胞;P<0.001）。与对照肽免疫组相比,MAP2-3免疫组小鼠脾脏和骨髓中浆细胞（B220^-CD138⁺）的比例明显增高（脾脏:P=0.022,骨髓:P=0.026）,MAP2-3免疫组脾脏中GC-B细胞（CD19⁺CD95⁺GL7⁺）的比例明显增高（P<0.001）,脾脏和骨髓中记忆性B细胞（B220⁺CD38⁺lgD^-GL7^-IgG⁺）的比例明显增高（脾脏:P=0.0096,骨髓:P=0.04）,而且表达在记忆性B细胞表面的CD80的比例也增高（P=0.007）,MAP2-3免疫鼠脾脏中TFH比例增高（P=0.009）,脾脏和淋巴结中效应型记忆性T细胞(T_EM,CD4⁺CD44⁺CD62L^-)比例明显增高（脾脏:P=0.022,淋巴结:P=0.019）。以LTA刺激脾细胞24h,MAP2-3免疫组分泌IL-6的含量显著高于对照肽免疫组（P<0.001）,real-time PCR结果显示MAP2-3免疫组IL-21的表达量明显增高（P<0.001）。结论:模拟LTA的合成肽MAP2-3免疫后能诱导BALB/c鼠体内产生免疫记忆。更多还原