IL-4对非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响

【作者】 梁蕊； 滕景芳； 李钊； 徐文斌； 孟明；

【机构】 河北大学基础医学院；

【摘要】 背景和目的:前期研究发现,腹腔注射α-GaICer可激活小鼠肝脏iNKT2细胞,改善高脂饮食诱导的肝细胞脂质沉积。为探究iNKT2细胞是否通过分泌IL-4间接影响脂代谢,采用C57BL/6J小鼠的原代肝细胞体外诱导脂肪肝细胞模型并给予IL-4干预,观察肝细胞内脂滴沉积及脂代谢相关指标变化,明确IL-4对脂肪肝细胞模型脂代谢的影响。方法:采用Seglen两步灌流法分离小鼠原代肝细胞,单层胶原法体外培养48 h,给予0.9mM游离脂肪酸混合物(油酸OA:棕榈酸PA=2:1)诱导24 h,构建小鼠原代肝细胞脂肪变性细胞模型。模型构建成功后加入终浓度为10ng/ml的IL-4共培养24h,油红O染色观察肝细胞内脂滴沉积;全自动生化分析仪测定肝细胞内TCH、TG、HDL、LDL、VLDL、AST、ALT等生化指标水平。结果:1、在Seglen两步灌流法的基础上进行改进,结合逆向灌流、多次低速离心等方法成功分离获取了产率高、活率高、纯度高的原代肝细胞,且体外存活时间可达1周。2、本方法具有以下特点:间断法灌流进行原位消化时,每只小鼠肝脏仅需10ml的Ⅳ型胶原酶(0.5 mg/ml);单层胶原培养法培养原代肝细胞,预铺鼠尾胶原蛋白Ⅰ型的浓度为0.03 mg/ml,远低于文献报道的浓度(1mg/ml)。3、原代肝细胞体外培养48h,加入终浓度为0.9mM的游离脂肪酸混合物诱导24h。油红O染色显示:与对照组相比,模型组肝细胞内出现明显的红色脂滴沉积;血生化指标显示:与对照组相比,模型组肝细胞内TCH、TG、HDL、AST、ALT水平明显高于对照组(P<0.05),LDL、VLDL值升高但无统计学意义(P>0.05),表明原代肝细胞脂肪变性细胞模型构建成功。4、IL-4干预后,油红O染色显示:与模型组相比,IL-4组肝细胞内红色脂滴沉积无明显变化;血生化指标显示:与模型组相比,IL-4组肝细胞中TCH、TG、HDL、VLDL、AST、ALT有降低趋势,但无统计学意义(P>0.05),LDL值不变,表明IL-4对脂肪肝细胞模型中脂代谢无显著影响。结论:1、采用Seglen两步灌流法及其改良方法成功分离获取小鼠的原代肝细胞,并构建小鼠原代肝细胞脂肪变性细胞模型;2、IL-4在体外对脂肪肝细胞模型脂代谢无调节作用。更多还原