布鲁氏菌病患者血清外泌体在巨噬细胞炎症条件下的极化作用

【作者】 陈志强； 朱玥洁； 李智伟； 于明凯； 张峰波； 丁剑冰；

【机构】 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室； 新疆维吾尔自治区人民医院临床检验中心； 新疆医科大学第一附属医院临床检验科；

【摘要】 目的:本研究旨在探讨炎症条件下布鲁氏菌病患者血清来源的外泌体对巨噬细胞极化和表型的影响。方法:用外泌体试剂盒分离出布鲁氏菌血清来源的外泌体,并使用透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和western-blot (WB)对外泌体进行表征。在6孔板中,利用PMA将人单核细胞系的THP-1诱导成M0巨噬细胞后,添加LPS和IFN-γ诱导M0巨噬细胞向M1巨噬细胞极化。在M1极化条件下,布鲁氏菌病患者来源外泌体与巨噬细胞共培养24小时。使用流式细胞术检测M1和M2巨噬细胞标记物的蛋白,用实时荧光定量PCR (qPCR)检测mRNA表达水平,并收集上清液,用于酶联免疫吸附测定(ELISA)。结果:外泌体从血清中成功分离出来。PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞样细胞转化。这些巨噬细胞经LPS和INF-γ刺激后有明显较长的突起生成。与外来体共培养的巨噬细胞显示出M1标记肿瘤坏死因子-α(TNF-α),CD86和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平显着降低。相比之下,M2标记转化生长因子-(TGF-β)和CD206水平适度增加。同时,在细胞培养上清液中获得了类似的结果。结论:布鲁氏菌血清外泌体可以促进M1巨噬细胞转化为M2巨噬细胞,降低M1巨噬细胞产生的促炎因子。更多还原