miR-let-7c-3p/Egr-1靶向调控TGF-β1/SMAD在白血病单核巨噬细胞定向分化中的作用

【作者】 齐福； 王朝喆； 王希娣； 韩杨； 孙瑞婧； 孙王男； 姜国胜；

【机构】 滨州医学院免疫与生物技术转化研究院； 济南市章丘区人民医院； 山东大学附属省立医院；

【摘要】 背景:白血病是一种细胞分化障碍性疾病,诱导分化治疗是研究的热门。通过前期研究及生物信息学数据筛选,我们将在白血病细胞分化过程中出现显著变化的miR-let-7c-3p与Egr-1作为分子靶标,在探讨它们相互调控的基础上,进一步分析其对下游TGF-β1/SMAD通路的靶向调控作用。目的:研究Egr-1在白血病细胞分化中的表达变化,探究miR-let-7c-3p/Egr-1的靶向调节TGF-β1/SMAD通路的作用,以及该信号轴在白血病细胞定向单核巨噬细胞分化中的作用。方法:利用PMA诱导人慢性髓系白血病细胞K562向单核/巨噬细胞方向分化,通过Wright-Gimesa染色、流式细胞术及周期检测各项分化指标;用RT-PCR、qRT-PCR和WB检测分化前后Egr-1的表达变化,q-PCR检测miR-let-7c-3p的表达变化;荧光素酶结合实验检测miR-let-7c-3p与Egr-1是否存在靶向结合关系,转染实验检测miR-let-7c-3p对Egr-1表达的调控作用。ChIP实验和RNA干扰实验分别检测Egr-1靶向结合和调节TGF-β1表达作用。CCK8和分化抗原检测实验观察各个信号分子调控对白血病细胞定向分化后的增殖水平和分化水平改变。结果:100ng/ml PMA诱导K562向单核/巨噬细胞方向分化,Wright-Gimesa染色显示细胞体积明显增大,核质比降低,成熟单核/巨噬细胞增多,流式细胞术检测加药组CD11b和CD14明显升高(p<0.001),细胞周期明显阻滞,G0/G1期显著增多(p<0.001);诱导过程中,Egr-1在蛋白水平表达为先升高后降低,在6h左右表达出现高峰(p<0.001),基因表达水平与蛋白水平一致(p<0.001),而PMA诱导分化后miR-let-7c-3p在基因水平表达量明显低于对照组(p<0.001);双荧光素酶报告基因结果显示,共转染miR-let-7c-3p mimic和Egr-1 WT组的荧光素酶活性明显低于共转染miR-let-7c-3p mimic和Egr-1 MUT组(p<0.01);Egr-1可以靶向结合TGF-β1,并且可调节下游TGF-β1表达水平。结论:miR-let-7c-3p/Egr-1靶向调控TGF-β1/SMAD信号轴是白血病细胞k562定向分化为单核/巨噬细胞的重要信号通路。更多还原