厚朴酚抗念珠菌作用及机制研究

【作者】 解雨飞； 周培茹； 华红；

【机构】 北京大学口腔医院口腔黏膜科；

【摘要】 目的:评估植物活性成分厚朴酚抗白念珠菌的作用及其可能机制。方法:菌丝形成抑制实验评估厚朴酚对白念珠菌酵母-菌丝相形态转换的作用;激光共聚焦显微镜扫描及三维重建定性分析厚朴酚对白念珠菌生物膜活性及空间结构的影响;RNA-seq技术分析厚朴酚对白念珠菌转录谱表达的影响;realtime-PCR检测厚朴酚对白念珠菌黏附及侵袭相关基因ALS 3、ALS 1,菌丝及生物膜形成相关基因EAP 1、EFG 1,磷脂酶合成相关基因PLB 2,分泌性天冬氨酸蛋白酶合成相关基因SAP 2,细胞壁β-1,3葡聚糖合成相关基因FKS 1、FKS 2,MAPK信号通路中核心基因HOG 1,以及cAMP与MAPK两条信号通路中的共同转录因子TEC 1表达的影响。结果:菌丝形成抑制实验结果显示厚朴酚可显著抑制白念珠菌酵母-菌丝相形态转换,且厚朴酚作用4h及16h后,白念珠菌菌丝形成率与厚朴酚浓度呈负相关;激光共聚焦显微镜扫描及三维重建后发现,厚朴酚可显著抑制白念珠菌生物膜活性并破坏其空间结构,使其细胞破裂,结构松散,厚度降低;RNA-seq结果显示,厚朴酚作用组表达差异基因共3618个,分析筛选后得出白念珠菌毒力因子相关目的基因10个;realtime-PCR结果显示,厚朴酚可显著抑制白念珠菌重要毒力因子黏附及侵袭相关基因ALS 3、ALS 1,菌丝及生物膜形成相关基因EAP 1、EFG 1,磷脂酶合成相关基因PLB 2,分泌性天冬氨酸蛋白酶合成相关基因SAP 2,胞壁β-1,3葡聚糖合成相关基因FKS1、FKS 2,MAPK信号通路核心基因HOG 1,及cAMP与MAPK信号通路中的共同转录因子TEC1的表达,表明厚朴酚可显著抑制白念珠菌多种毒力因子的表达,且其抑制作用可能与Ras1-cAMP-Efg 1信号通路及MAPK信号通路相关。结论:本研究结果显示,厚朴酚可显著抑制白念珠菌黏附与侵袭、菌丝与生物膜、水解酶分泌、胞壁β-1,3葡聚糖合成等相关基因的表达,其可能机制为厚朴酚通过Ras 1-cAMP-Efg 1及MAPK信号通路发挥作用。本研究较为全面的探索了厚朴酚抗白念珠菌的作用靶点及分子机制,为厚朴酚抗念珠菌体内研究的开展及其未来的临床应用奠定了重要的理论基础。更多还原