动脉粥样硬化中巨噬细胞Mox极化与铁死亡及槲皮素的干预效应

【作者】 李红侠； 曹志强； 姚平；

【机构】 华中科技大学同济医学院；

【摘要】 目的探讨动脉粥样硬化中,槲皮素对动脉的保护作用,诱导巨噬细胞Mox极化并抑制其铁死亡的特殊作用。方法 7-8周龄、20 g左右的雄性ApoE-/-C57BL/6J小鼠57只,随机分为对照组(CON)、高脂组(HFD)和高脂加槲皮素组(HFD+Q)。16周结束后进行主动脉油红O染色;检测血清的胆固醇(TC、HDL-C、LDL-C)、总甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)及铁代谢相关指标;免疫荧光染色定位Mox巨噬细胞。50μg/ml ox-PAPC及50μM槲皮素单独或联合处理RAW264.7细胞,流式细胞术检测Mox、M1、M2巨噬细胞表型;western blot检测铁死亡、铁转运、铁储存及抗氧化蛋白水平。FSP1抑制剂、GPx4抑制剂、DHODH抑制剂、槲皮素及CoQ10处理后,检测细胞活性、NADP+/NADPH、MDA和铁死亡相关蛋白水平。结果与CON组相比,HFD组主动脉斑块数量显著增加;血清TG、TC、LDL-C、MDA显著上升,而HDL-C、GSH显著下降;血清和动脉中有大量铁沉积。槲皮素干预后主动脉斑块明显减少;血清TG、TC、LDL-C、MDA均显著降低,并恢复HDL-C与GSH水平;血清游离铁水平、铁蛋白重链(FTH)与铁蛋白轻链(FTL)的水平均显著下降。与CON组相比,HFD组HO-1与TrxR1共定位明显增加,槲皮素处理后共定位进一步增加。在人颈动脉中通过CD68、HO-1与TrxR1共定位发现Mox巨噬细胞随着病变加重出现先增加后减少的趋势。ox-LDL处理后M1、Mox表型增强,M2表型减弱;槲皮素处理后,Mox表型进一步增强,M1表型减弱,M2表型增强。与M0相比,ox-PAPC诱导Mox极化后细胞活性升高,显著抑制RSL3诱导的铁死亡;槲皮素处理后进一步升高了Mox巨噬细胞活性。与M0相比,Mox巨噬细胞内FSP1、Nrf2、HO-1、TrxR1表达明显上调;而FTH的表达明显下降;槲皮素处理后FSP1、Nrf2、HO-1、TrxR1进一步上调;而GPx4、DHODH的表达始终没有变化。进一步,iFSP1处理使Mox巨噬细胞发生铁死亡,降低NADP+/NADPH、和FSP1的表达;槲皮素及CoQ10处理后显著恢复细胞活性并逆转上述指标。结论槲皮素缓解高脂诱导的主动脉损伤,可能与其调控FSP1抑制Mox巨噬细胞铁死亡有关。更多还原