绵羊乳腺反应器表达褪黑素合成限速酶基因用以合成褪黑素

【作者】 马腾； 陶景丽； 何长久； 杨明辉； 田秀芝； 张效生； 张金龙； 冯建忠； 姬鹏云； 宋玉坤； 韩红兵； 连正兴； 刘国世；

【机构】 中国农业大学动物科技学院； 天津畜牧兽医研究所；

【摘要】 <正>引言褪黑素在哺乳动物体内主要由松果体合成,以其抗氧化、清除自由基和调节机体免疫的作用被熟知。基因AANAT和HIOMT是褪黑素合成限速酶。本研究构建绵羊乳腺反应器用来生产天然褪黑素;并探索羊乳腺中插入基因指导下褪黑素合成的规律。材料方法克隆获得绵羊羊褪黑素合成限速酶基因AANAT和HIOMT,分别构建转染筛选载体,和乳腺特异性表达载体。转染载体用脂质体法转染杜泊绵羊乳腺上皮细胞,构建转基因阳性细胞系用于体外验证。线性化表达载体,于杜泊绵羊原核胚时期利用原核显微注射,结合输卵管移植术,生产过表达褪黑素合成酶的转基因羊。测序鉴定后代基因型,并采集阳性母羔乳腺细胞体外检测外源基因表达情况。更多还原