重组鸡痘病毒rFPV-F-VPO实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

【作者】 任静强； 鲁会军； 刘燕瑜； 刘昊； 岳云强； 刘振江； 金宁一；

【机构】 军事医学科学院军事兽医研究所；

【摘要】 <正>目的通过对real-time PCR反应条件的优化,建立重复性好,特异性、敏感性高的标准品和标准曲线。采用荧光染料SYBR Green渗入法,定量分析NDV F基因和IBDV-VPO基因,在重组鸡逗病毒rFPV-F-VPO第1、5、10、15、20代次中的表达情况。材料方法将重组鸡逗病毒rFPV-F-VPO,分别接种CEF细胞传代20代次,提取1、5、10、15、20代次重组鸡逗病毒的基因组,同时优化荧光定量PCR反应条件,根据病毒FHN和FVP0核酸序列,设计合成特异性引物,构建制备标准DNA模板。根据优化的PCR条件,分别进行荧光定量PCR扩增。用标准品绘制标准曲线,根据标准曲线定量计算各代次病毒的拷贝数,分析各代次病毒拷贝数之间的关系。更多还原