抗病转基因绵羊胚胎生产与移植

【作者】 刘国世； 汪锋； 柴孟龙； 田秀芝； 邓守龙； 韩红兵； 张运海； 张璐； 卓志勇； 徐静； 张金龙； 张效生； 冯建忠； 连正兴；

【机构】 中国农业大学； 安徽农业大学动物科技学院； 天津市畜牧兽医研究所；

【摘要】 [目的]建立高效的绵羊原核胚生产、人工授精、显微注射、胚胎移植转基因技术体系。同时,利用睡美人(Sleeping Beauty,SB)转座系统的高效性、Toll样受体(Toll like receptor,TLR)对广谱抗病能力的开关调节作用及沉默口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1基因表达的特性,构建抗口蹄疫病毒RNAi载体、TLR4表达载体,通过显微注射技术进行抗病转基因绵羊的生产。[方法]首先完成抗口蹄疫病毒RNAi靶点筛选、TLR4基因克隆、睡美人转座子结构的改造和转座酶的优化,然后构建抗口蹄疫病毒RNAi载体、TLR4表达载体,筛选高效的绵羊超数排卵方案,最后通过人工授精、显微注射、胚胎移植生产抗病转基因绵羊。[结果]本研究采用CIDR+FSH减量+PMSG方案进行超数排卵,平均冲取可用原核胚数为12.95枚;显微注射后移植平均妊娠率为50.98%,产羔率167,9%;注射TLR4基因PCR阳性率为66.70%;注射VP1基因(普通载体)后代阳性率为38.80%;两基因混住时TLR4阳性为33.33%,VP1阳性为58.33%;在北京、天津两地,注射VP1基因(睡美人载体)后代阳性率分别为50.00%、57.14%。[结论]本研究显著提高了绵羊原核胚生产、人工授精、显微注射、胚胎移植的效率并批量获得了转TLR4及VP1 RNAi转基因绵羊。更多还原