敲低MCM2基因表达可增强卵巢癌细胞对卡铂的敏感性

【作者】 邓旻洁； 孙佳俊； 谢素红； 郑慧； 王砚春； 卢仁泉； 郭林；

【机构】 复旦大学附属肿瘤医院检验科； 复旦大学肿瘤学系；

【摘要】 目的:以A2780 MCM2-KD(MCM2-knock down)卵巢癌稳转细胞为研究对象,观察抑制MCM2基因的表达对细胞生物学功能所造成的影响。探讨MCM2对卵巢癌细胞卡铂敏感性的影响及相关作用机制。方法:构建靶向MCM2基因的慢病毒载体并感染A2780细胞后,通过Western-Blot验证MCM2-KD细胞MCM2基因敲低的效率。通过CCK-8实验观察MCM2对细胞体外生长的影响,流式细胞仪检测MCM2对细胞周期及细胞凋亡的影响。通过细胞克隆形成实验观察敲低MCM2后细胞对不同浓度卡铂(0ug/ml,2.5ug/ml,3.5ug/ml,5ug/ml,7.5ug/ml)敏感性的变化。利用卡铂及紫外对DNA进行人为损伤,通过Western-Blot观察γ-H2AX及p53的表达情况。结果:MCM2-shRNA转染后A2780细胞MCM2蛋白表达水平明显降低。MCM2表达下调后对A2780细胞在体外增殖有轻微的抑制作用,G0/G1期细胞比例增加,G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡无明显变化。细胞克隆形成结果显示经不同浓度卡铂处理后,MCM2-KD组与对照组相比克隆形成数均明显减少(p<0.05)。Western-Blot结果显示卡铂处理或紫外照射后,与对照组相比,MCM2-KD组γ-H2AX及p53表达水平均升高。结论:抑制MCM2基因表达后,A2780细胞的生长受到抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞对卡铂敏感性增加。卡铂/紫外损伤后,MCM2-KD组γ-H2AX水平相对对照组显著增加,提示敲低MCM2基因后,DNA损伤增加;p53水平相对显著升高,提示敲低MCM2基因后,肿瘤细胞对卡铂敏感性增加可能与p53凋亡途径相关。更多还原