基于G-四联体/杂交链式反应的DNA甲基转移酶活性研究

【作者】 刘金映； 李亚茹； 严景丽； 张江艳； 成永强；

【机构】 药物化学与分子诊断教育部重点实验室河北大学化学与环境科学学院；

【摘要】 DNA甲基转移酶是催化DNA甲基化的酶,^[1]研究表明DNA甲基转移酶是一种潜在的生物标志物,是不同类型癌症诊断和治疗过程中的药物靶点,因此DNA甲基转移酶活性的检测在疾病的诊断和治疗中具有重要意义。^[2]我们设计了一条发夹探针HP,其茎部含有Dam甲基转移酶的识别位点。当Dam甲基转移酶存在时,HP能够被限制性内切酶切断,切下的环部分可以作为引物引发串联杂交链式反应（HCR）,拉近四分之一和四分之三G-四联体序列的距离。在K⁺存在的情况下,折叠成G-四联体,嵌合原卟啉IX（PPIX）产生强的荧光信号。反之无Dam甲基转移酶时,无法引发体系中的串联HCR反应,荧光信号较低。该方法无需标记探针,采用HCR反应进行无酶信号放大,操作简单,成本低,为DNA甲基转移酶活性的检测提供了一个新策略,同时能够筛选甲基转移酶抑制剂和进行实际样品分析。更多还原