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用于RNA-蛋白相互作用研究的化学探针的开发
【机构】 北京大学化学学院北京大学合成与功能生物分子中心北京市成府路292号；
【摘要】 RNA结合蛋白(RNAbindingproteins,RBPs)通过与RNA相互作用,广泛参与到RNA的剪切、转运、编辑、胞内定位及翻译调控等过程中。Orthogonal organic phaseseparation(OOPS)技术可以高效地分离纯化RNA-蛋白质复合物[1]。其原理是细胞经过紫外交联后,用TRIZOL进行裂解,之后通过加入氯仿进行相分离。游离的RNA和蛋白分别处于水相和有机相,RNA-蛋白复合物可在中间层被轻易捕获。但是紫外交联效率极低。我们开发了一种化学交联探针,并结合OOPS技术,简易高效地得到RNA-蛋白复合物。这种探针的效率比紫外交联高,背景比甲醛交联低,且交联半径长,适用性更广。我们利用此种技术鉴定到更多的RBP,并且可以利用到原代细胞中,鉴定原代细胞在刺激前后的RBP的变化状态,解析细胞生物学现象。
【关键词】 RNA-蛋白相互作用；
化学交联；
免疫细胞；
RNA结合蛋白；
相分离；
- 【会议录名称】 第十一届全国化学生物学学术会议论文摘要（第二卷）
- 【会议名称】第十一届全国化学生物学学术会议
- 【会议时间】2019-11-18
- 【会议地点】中国广东广州
- 【分类号】O657.3;Q503
- 【主办单位】中国化学会化学生物学专业委员会