【作者】 江福能； 陈冠星； 梁应科； 江敏耀； 叶剑恒； 刘文华； 吴永定； 何慧婵；

【Author】 Fueng Jiang;Guan-xing Chen;Yin-ke Liang;Min-yao Jiang;Jian-heng Ye;Wen-hua Liu;Yong-din Wu;Hui-chan He;Department of Urology,Guangzhou First People‘s Hospital,Guangzhou Medical University;

【机构】 广州医科大学附属广州市第一人民医院泌尿外科和广东省临床分子医学及分子诊断重点实验室； 广东省农业科学院农业生物基因研究中心； 广州医科大学公共卫生学院； 广州医科大学广州医科大学附属第一医院广东省泌尿外科重点实验室；

【摘要】 目的:研究探索在细胞水平实验雄激素受体基因敲除的实现方法,为前列腺疾病雄激素受体通路的功能研究提供细胞株材料。方法:通过在线软件设计针对雄激素受体(AR)的sg RNA靶向序列,将这一靶序列克隆到PX330载体中并测序验证。将克隆好的CRISPR-AR载体转染T293细胞,提取DNA,PCR和测序鉴定基因敲除效率。结果:CRISPR-AR载体测序证明质粒载体构建成功;T293细胞转染实验证明CRISPR-AR载体具有80%以上的敲除效率。结论:基于CRISP/Cas9技术的构建的CRISPR-AR载体可用于细胞的AR敲除,可进一步用于AR基因敲除细胞株构建。更多还原

【Abstract】 Objective To explore the experiment method for knocking out the androgen receptor at cellular level, which can help to provide androgen receptor knock out cell line for the androgen pathway research. Methods through the online software, the sg RNA target sequence of androgen receptor(AR) will be designed and cloned into PX330 plasmid. The plasmid will be confirmed by sequencing. CRISPR-AR plasmid transfect T293 cells, DNA extraction, PCR and Restriction enzymes, Sequencing experiment will be carried out to test the knockout efficiency. Results CRISPR-AR plasmid constructed successfully contained the sgR NA sequencing targeting the AR exon 1, T293 cell transfection experiments show CRISPR-AR plasmid has more than 80% of the knockout efficiency. Conclusion based on the technology of CRISP/Cas9, CRISPR-AR plasmid can be used for cell AR knockout, can be further used for construction of AR gene knock out cell lines.更多还原