沉默Caveolin-1对乏氧微环境中癌相关成纤维细胞能量代谢的影响

【作者】 赵丹； 陈丹； 唐洪； 杨凯；

【机构】 重庆医科大学附属第一医院；

【摘要】 <正>研究目的:探讨Caveolin-1基因沉默对乏氧状态下癌相关成纤维细胞(CAFs)代谢的影响。研究方法:由口腔鳞癌癌周组织中提取、分离、鉴定和培养癌相关成纤维细胞。构建携带Caveolin-1 siRNA的慢病毒并转染CAFs。在乏氧(0.5%O2)状态下培养转染前后的CAFs。通过电镜观察转染前后CAFs细胞中线粒体的变化、溶酶体及自噬体的出现情况。通过线粒体特殊染色、膜电位检测、吸光度检测分析转染前后CAFs细胞线粒体的形态、膜电位、ATP浓度以及培养基中葡萄糖、乳酸浓度,同时采用Westernblot技术检测转染前后CAFs对自噬标记物LC3A/B、 ATG16L、Beclin1,以及线粒体自噬标记物BNIP-3、BNIP-3L的表达情况。研究结果:与转染后的CAFs相比,乏氧状态下未转染的CAFs细胞中线粒体缩小、功能减弱,部分有溶酶体和自噬体的出现,细胞ATP合成减少,同时培养基中葡萄糖浓度减少,乳酸浓度升高。自噬标记物、线粒体自噬标记物在未转染的CAFs中表达明显增强。研究结论:Caveolin-1基因沉默可能抑制了乏氧微环境中CAFs的自噬,从而抑制其糖酵解释能。更多还原