同位素标记-磁固相萃取UHPLC-MS/MS分析含羟基的胆固醇代谢物与药物分子

【作者】 赵先恩； 汪鑫； 徐燕秋； 朱树芸； 尤进茂； 白玉； 刘虎威；

【机构】 山东省绿色天然产物与医药中间体高校重点实验室曲阜师范大学化学与化工学院； 北京大学化学与分子工程学院；

【摘要】 含羟基的胆固醇和代谢物(HCM)是阿尔茨海默病(AD)的潜在生物标志物。因此,体内HCM的定量分析可以作为早期临床诊断的指标[1, 2]。然而,由于生物样品中HCM含量极低,而且样品基质复杂,导致其定量检测仍然面临巨大挑战。我们采用稳定同位素标记衍生化(SILD)与磁分散固相萃取(MDSPE)相结合的策略,使用多反应监测模式(MRM)的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)方法,建立含羟基的胆固醇和代谢物的定量分析方法。采用设计合成的一对新型罗丹明类轻/重衍生试剂:d0/d3-6-N-甲基-罗丹明6G-甲酸(d0/d3-MCR6G,图1),分别标记大鼠血微透析液和羟固醇标准品,衍生产物溶液混合后进行磁性氧化石墨烯MDSPE富集和净化,用UHPLC-MS/MS检测,将d3-MCR6G标记的羟固醇标准品用作内标,以减小LC-MS分析中基质效应引起的定量误差[3]。在优化条件下,定量分析的线性关系良好,相关系数R2> 0.985,检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.24-0.31 pg/mL和1.5-1.8 pg/mL。该方法提高了羟固醇的定量检测灵敏度和准确度,可为AD的诊断及治疗监测提供新方法。同时,采用d0/d3-MCR6G试剂研究了雷公藤甲素的活体大鼠药代动力学,有望用于药效评价与药物筛选。更多还原