同位素标记结合超高效液相色谱-串联质谱分析神经类固醇

【作者】 徐燕秋； 汪鑫； 赵先恩； 白玉； 刘虎威；

【机构】 山东省绿色天然产物与医药中间体重点实验室曲阜师范大学化学与化工学院； 北京分子科学国家研究中心北京大学化学与分子工程学院分析化学研究所；

【摘要】 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种多发于中老年人的神经退行性疾病,有报道证明神经类固醇及其代谢物含量的变化与PD密切相关,因此发展神经类固醇的高效高灵敏分析方法具有重要意义[1, 2]。然而,由于生物样品中此类物质的含量低及有复杂的基质效应,从而使其定量检测面临巨大挑战。鉴于此,我们采用稳定同位素标记衍生(SILD)与磁分散固相萃取(MDSPE)相结合的技术,使用多反应监测(MRM)模式的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)方法,来检测神经类固醇及其代谢物含量的变化。我们设计合成了一对新型罗丹明6G轻重标衍生试剂:d0/d3-6-N-甲基-罗丹明6G-甲酸(d0/d3-MCR6G),分别标记大鼠脑微透析液和神经类固醇标准品,将d3-MCR6G标记的神经类固醇标准品用作定量的内标,以减小MS分析中基质效应和离子抑制效应引起的定量误差[3]。衍生产物1:1混合后结合MDSPE富集和纯化,然后用UHPLC-MS/MS检测分析。在优化的衍生化和提取条件下,定量分析的线性关系良好,相关系数R2>0.99,检测限(LOD)和定量(LOQ)分别为0.06-0.12 pg/ml和0.3-0.4 pg/ml。该方法提高了神经类固醇的定量检测灵敏度和准确度,可为PD的监测诊断及治疗提供新的分析方法。更多还原