查耳酮9X诱导肝癌细胞凋亡的机制

【作者】 徐冉晨； 张勇； 董乃维； 刘鑫； 杨宝峰；

【机构】 哈尔滨医科大学药学院；

【摘要】 目的:细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的自主的细胞程序性死亡。Caspase家族在凋亡中发挥重要作用,其中Caspase-3和Caspase-8尤为重要,活化后的Caspase-3是一种重要的凋亡标记物。而线粒体细胞凋亡由Bcl-2家族调控。查耳酮9X是天然产物中常见的一类化合物。研究发现查耳酮9X与细胞凋亡密切相关,但具体机制未知。因此,本课题旨在探讨查耳酮9X通过调控Caspase家族以及Bcl-2家族相关基因诱导肝癌细胞凋亡。方法:通过Claisen-Schmidt法合成查耳酮9X,在体实验,将30只雄性无胸腺裸鼠随机分为5组,每组6只,阴性对照组(未做任何处理);阳性对照组(5-FU,10 mg/kg),高剂量组(查耳酮9X,1.12 mg/kg),中剂量组(查耳酮9X,0.56 mg/kg),低剂量组(查耳酮9X,0.28 mg/kg)。将HepG2肿瘤细胞皮下注射(5×10~6/只)至裸鼠体内建立异位肝癌肿瘤模型,24小时后,连续两周尾静脉注射查耳酮9X,观察肿瘤大小变化情况。体外实验,选取肝癌细胞系HepG2,用不同浓度的查耳酮9X(50μmol/L,100μmol/L)处理HepG2,24小时后,5-FU(30μmol/L)作为阳性对照,Cell Counting Kit-8(CCK8)方法检测细胞活力;Transwell实验测定细胞迁移情况。Western blot测量两种细胞中Cleaved-Caspase3,Cleaved-Caspase8,Bcl-2和Bax等凋亡相关基因的表达。结果:在体实验显示查耳酮9X明显减小了裸鼠体内的肿瘤大小,其作用效果与5-FU一致;Cell Counting Kit-8(CCK8)实验结果显示查耳酮9X可显著降低HepG2的细胞活力;Transwell实验表明查耳酮9X可抑制HepG2细胞的迁移和转移;Western blot实验表明在HepG2细胞中,查耳酮9X可显著降低Bcl-2,增加Bax,Cleaved-Caspase3,Cleaved-Caspase8的蛋白表达水平。结论:查耳酮9X通过Caspase-3/8的活性位点以及Bcl-2,Bax诱导HepG2细胞凋亡。查耳酮9X的低毒性和对肿瘤的良好抑制效果表明其可能是一个很好的新型临床抗癌药物候选药物。更多还原