鸡源大肠埃希菌中bla_CTX-M和mcr-1的共同水平传播机制

【作者】 李文娅； 胡慧慧； 邝启红； 吴华； 胡功政； 苑丽；

【机构】 河南农业大学牧医工程学院；

【摘要】 [目的]通过S1-PFGE和Southern blot的方法对bla_CTX-M和mcr-1在相同菌株质粒中的定位进行分析,为了解两种耐药基因在细菌中的水平传播机制提供科学依据。[方法]以12株同时携带bla_CTX-M和mcr-1的临床鸡源大肠埃希菌为供体菌,以C600为受体菌,进行质粒接合试验,然后在同时含有适量头孢噻肟、多黏菌素和利福平的麦康凯琼脂平板上筛选同时携带bla_CTX-M和mcr-1的疑似接合子,先采用微量肉汤稀释法检测疑似接合子和原菌对头孢噻肟和多黏菌素的敏感性,再采用PCR扩增技术检测疑似接合子中的CLTX-M和mcr-1基因,接着通过PFGE对疑似接合子进行鉴定。最后用S1-PFGE和Southern blot检测同一菌株中bla_CTX-M和mcr-1在质粒中的定位。[结果]12株同时携带bla_CTX-M和mcr-1的鸡源大肠埃希菌中有10株成功获得疑似接合子,药敏试验结果表明10个接合子中除LWY27J对头孢噻肟高度敏感外,其他均对头孢噻肟和多黏菌素耐药,且与原菌间无明显差异。PCR检测结果表明10个接合子均检出同时携带有bla_CTX-M和mcr-1基因。PFGE结果表明10个接合子与受体菌具有高度相似的谱型,属于同一个克隆群,确认为原菌的接合子,其接合率为83.3%（10/12）。S1-PFGE结果显示,10株鸡源大肠埃希菌中均含有2～4个质粒,多数菌株有1～2个质粒成功转移给受体菌。Southern blot发现有LWY3和LWY24两株菌中在约54.7kb质粒上同时携带bla_CTX-M和mcr-1,LWY6菌中在约244.4kb质粒上同时携带bla_CTX-M和mcr-1;其中LWY24菌在54.7kb和104.5kb两个质粒上均含有bla_CTX-M基因。[结论]目前临床同时携带bla_CTX-M和mcr-1的鸡源大肠埃希菌中约有30%的菌株中两种耐药基因位于同一接合型质粒上,会导致两种耐药基因同时进行快速的水平传播,给临床有效防控耐药菌感染造成极大困难。更多还原