引起番茄果实内部腐烂的链格孢菌的鉴定

【作者】 白永振； 王潞； 郑雪玲； 王坦； 庞发虎； 陶爱丽； 焦铸锦； 黄思良；

【机构】 南阳师范学院农业工程学院；

【摘要】 番茄(Solanum lycopersicum L.)富含对人体健康的营养成分。2017年7月,从河南省南阳市当地超市购买的番茄果实上发现一种未知的病害。发病初期,番茄果实外部无症状,与健康果实没有明显区别,切开病果后,其内部霉变腐烂症状才得以显现。染病的维管束呈黑色或黑褐色,部分维管束变细或断裂,中果皮产生褐色的病斑。将染病的番茄果实内部组织用灭菌的解剖刀切取后置于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板上,在28℃下培养5d,从并组织上长出形态一致的链格孢(Alternaria sp.)。随机选取2株(At1和At2)经单孢分离纯化后进行致病性测定及形态和分子鉴定。两株供试菌在PDA培养基上产生圆形或近圆形具较茂密气生菌丝的菌落,菌落初为灰白色,培养3～4d后转黑褐色至墨绿色,在水琼脂(WA)平板上菌丝体可稀疏生长并产孢。WA上产生的分生孢子多数卵形至椭圆形,黑褐色,呈长链状着生在分生孢子梗上。菌株At1和At2的分生孢子分别有42.3%和56.8%具长约4～5μm的喙(调查孢子数109)。每个分生孢子有0～6 (平均3.4)个横隔和0～5 (平均0.8)个纵隔或斜隔。随机调查110个样本,菌株At1和At2的分生孢子大小分别为(11.4～33.3)(平均20.3)μm×(7.3～15.1)(平均10.6)μm和(10.0～39.3)(平均22.7)μm×(4.0～16.4)(平均10.9)μm。扩增供试菌株的rDNA-ITS (internal transcribed spacer)和β-微管蛋白基因序列,将相关序列在GenBank登记后得到的菌株At1的rDNA-ITS和β-微管蛋白基因序列登录号分别为MG558002和MG558003,菌株At2的相应序列登录号分别为MG925323和MG925327。在构建的基于β-微管蛋白基因序列的系统发育树中,菌株At1和At2与多株细交链孢菌(Aternaria alternata)相聚同一群,与其他Alternaria app.明显区分别开来。BLAST比对表明,供试菌株的rDNA-ITS序列与GenBank中多株A.alternata的相同序列的最大相似性达100%。将供试菌株在PDA平板上28℃培养6d,用无菌水制备分生孢子悬浮液(5×10~8 spores/mL),用无菌注射器注射到健康的离体成熟的番茄上,以注射无菌水为对照。在28℃培养7d对接种番茄和对照番茄进行解剖观察,在接种番茄上产生了内部腐烂症状,外表无症状,与原初病果症状相似;对照果实内外部均无症状。从接种发病番茄的内部病组织中再分离获得了与接种菌株形态完全一致的链格孢分离物。遵循柯赫法则验证了供试菌株对番茄的致病性。细交链孢菌引起番茄果实外部腐烂症状已有报道,该菌引起番茄内部腐烂而外部不显症的现象未见报道,笔者推测引起该症状的细交链孢菌很可能是通过维管束进行系统侵染的、在番茄内部组织厌氧环境中具有较强适应能力的新的A.alternata菌系。更多还原