流产衣原体荧光定量PCR方法的建立及小鼠感染菌体载量测定

【作者】 张志君； 李兆才； 娄忠子； 周继章；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室；

【摘要】 【目的】建立荧光定量PCR (qPCR)对流产衣原体的检测方法。在流产衣原体灭活疫苗的生产中,代替具有主观判断影响的涂片染色疫苗效价检测方法。【方法】根据流产衣原体富含半胱氨酸的胞质蛋白(envB)基因保守序列设计特异性引物,利用EnvB-PMD19T阳性质粒为参考标准品,优化了反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性试验,检测了感染流产衣原体小鼠的菌体载量。【结果】以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1×102 copies/μL～1×106 copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为97%。灵敏度试验表明,该检测方法的最低检出限低至10copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。消化道检测到的菌体载量高于腹腔注射的菌体载量。【结论】本研究建立的方法能够有效的检测小鼠相应脏器的菌体含量,为流产衣原体灭活疫苗的效检提供可靠的检测方法。更多还原