动物衣原体RPA检测方法的建立

【作者】 费媛媛； 李兆才； 娄忠子； Muhammed Mustafa； 张志君； 赵宏涛； 祁世荣； 李长云； 周继章；

【机构】 家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所； 陕西省动物疫病预防控制中心； 青海省都兰县宗家乡兽医站； 青海省海晏县畜牧兽医站；

【摘要】 对病原体进行快速有效的检测是疾病诊断的研究热点,衣原体病原具有广泛的致病性,是一种重要的人畜共患病,能引起人和动物的多种疾病。为建立一种快速、准确的动物衣原体检测方法,本研究基于动物衣原体的保守基因envB的序列,设计并合成4对引物与1条探针,筛选出1组可用于动物衣原体特异性重组酶聚合酶扩增(Recombines Polymerase Amplification,RPA)的引物和探针组合,建立了一种动物衣原体特异性荧光RPA恒温检测方法。并对该检测方法的特异性和灵敏度进行了试验检测。结果表明,该检测方法在37℃恒温反应20 min,即可实现对动物衣原体目的基因片段的有效扩增;特异性检测试验结果表明,该方法仅能对衣原体基因组进行特异性扩增,而对其它能够引起动物流产的常见病原核酸没有任何扩增;灵敏度检测试验结果表明,本研究所建立的衣原体RPA检测方法,当模板量达到101个拷贝即可检测到。同时利用建立的RPA检测方法和普通PCR方法对临床样品进行衣原体检测,10份临床测试样品均为2017年3月从青海省海晏县采集的羊流产胎儿组织,依照基因组提取试剂盒操作手册进行基因组DNA提取,检测结果显示本研究所建立的动物衣原体RPA检测方法与普通PCR方法的阳性检出率完全一致。以上研究结果表明本研究所建立的动物衣原体RPA检测方法操作简单方便、灵敏度高,短时间能获得准确可靠的诊断结果,对动物衣原体的临床检测和疾病诊断提供了一种新的、可靠的技术支持,适用于基层单位和野外快速检测,为动物衣原体病的一线防控提供了一种新的检测方法。更多还原