快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株RT-PCR检测方法的建立和应用

【作者】 曾繁文； 刘向楠； 饶丹； 丛锋； 郭鹏举； 罗满林； 陈梅丽；

【机构】 广东省实验动物监测所； 华南农业大学兽医学院； 广东省实验动物重点实验室；

【摘要】 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),俗称蓝耳病,该病的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起免疫抑制、母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道疾病。我国的猪繁殖与呼吸综合征病毒分离毒株均属美洲型,迄今还没有发现欧洲型毒株,同时我国的分离毒株也存在变异现象,现已发现有缺失变异毒株的存在,主要为猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株。在临床上难以区分,这给临床治疗带来了一定的困难,所以建立快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株非常必要,本试验参考GenBank中公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株序列,我们设计了一对特异性引物,通过条件优化等手段,以此建立了RT-PCR技术。通过RT-PCR扩增,电泳后获得电泳条带大小不同的PCR产物以此区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,本研究进行了特异性试验和灵敏度试验,并用RT-PCR的方法检测实验室保存的12份临床阳性样品。结果表明:可以通过RT-PCR技术区分经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株并且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等猪常见病毒无交叉反应;经典毒株的灵敏度检出限为2.04×10~3copies/μL,高致病性毒株的灵敏度检出限为4.12×10~2copies/μL,天津疫苗株的灵敏度检出限为1.68×10~3copies/μL;临床样品检测试验显示,1份为经典毒株样品、5份为变异株样品、5份为天津疫苗株,与测序结果相符。说明成功建立了同时区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株的RT-PCR方法,且特异性强、灵敏度较高、重复性好、操作简单。更多还原