旋毛虫不同发育时期基因重组蛋白的免疫原性分析及保护性研究

【作者】 孙召金； 丁静； 王楠； 刘菁； 王艳凤； 孙尧； 赵静； 吴秀萍；

【机构】 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室；

【摘要】 旋毛虫病是一种重要的食源性人兽共患病,可感染人和100多种哺乳动物,当人类生食或半生食含感染期幼虫的肉类时可感染旋毛虫病。由于寄生虫抗原在发育期间的变异及多种分子参与寄生过程,单独使用一种蛋白很难产生有效的免疫保护效力,因此,多种抗原联合疫苗可能产生有效的保护。本研究选用来自旋毛虫不同发育时期c DNA文库中的4种高丰度基因:旋毛虫肠道感染性肌幼虫期半胱氨酸蛋白酶抑制剂类似物基因(Ts-clp)、旋毛虫成虫期丝氨酸蛋白酶基因(Ts-Adsp)、旋毛虫新生幼虫期丝氨酸蛋白酶基因(Ts-NBLsp)和旋毛虫肌幼虫期丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Ts-serpin)。通过分析实验室已成功构建的4种基因p ET-28a表达载体重组菌的反应原性和免疫原性,以期研制出高效安全的旋毛虫重组蛋白联合疫苗。首先,诱导表达4种重组蛋白并进行亲和层析纯化。4种重组蛋白均可与旋毛虫感染猪、鼠血清反应,说明旋毛虫不同发育时期基因重组蛋白具有较强的反应原性。纯化后的4种重组蛋白制备多克隆抗体,然后与旋毛虫ES产物、虫体粗提物抗原反应,结果显示4种重组蛋白均为高反应原性抗原,且其抗血清可与天然抗原产生免疫反应。其次,利用免疫荧光技术分析4种抗原基因的表达特性,显示4种蛋白可作为抗旋毛虫疫苗的良好候选抗原。重组蛋白免疫小鼠均可诱导体液及细胞免疫应答,表现为特异性IgG抗体升高和混合型Th1/Th2反应,显示Th1(IFN-γ、IL-2)和Th2(IL-4、IL-10、IL-13)型细胞因子升高,并以Th2型占优势。最后,确定铝佐剂为重组蛋白联合疫苗的免疫佐剂,每种蛋白20μg为最佳免疫剂量。4种重组蛋白联合免疫小鼠可诱导机体产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应,且每种蛋白均可诱导对排虫有利的免疫反应,并在机体中发挥协同作用,诱导肌幼虫减虫率提高至70.9%。综上所述,本研究表明抗旋毛虫感染有效的疫苗应该由多种寄生虫抗原组成,而且有效的蛋白成分可以在机体中发挥协同作用,诱导宿主产生强烈的保护性免疫反应。更多还原