重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA检测方法的建立

【作者】 谢志勤； 谢芝勋； 刘加波； 庞耀珊； 邓显文； 谢丽基； 范晴； 罗思思； 牟群； 莫文胜；

【机构】 广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室； 广西桂林市动物疫病预防诊断中心； 广西永福县动物疫病预防诊断中心；

【摘要】 【目的】纯化牛分枝杆菌CFP-10重组蛋白,将其作为包被抗原包被ELISA板,建立间接ELISA方法检测牛分枝杆菌。【方法】测定纯化后CFP-10重组蛋白的浓度并稀释,将稀释的CFP-10重组蛋白包被96孔ELISA反应板,应用方阵法测定最佳条件并建立间接ELISA检测方法。【结果】通过优化各反应条件,确定包被抗原的浓度为8μg/mL的CFP-10重组蛋白,封闭液5%的脱脂奶,一抗最佳稀释浓度为1:200倍稀释,羊抗兔IgG酶标二抗浓度为1:500倍稀释,包被时间为37℃1h,最佳二抗作用时间为1h;TMB底物作用时间为10min。特异性试验表明该方法只与牛分枝杆菌呈阳性反应,与布鲁氏杆菌、口蹄疫没有交叉反应。敏感性实验能检测到1:320倍稀释的血清。【结论】本实验建立的重组CFP-10蛋白间接ELISA方法可以用于牛分枝杆菌的检测。更多还原