肥大细胞对布鲁菌S2株的模式识别与活化效应研究

【作者】 曹志然； 闫伟娇； 王蓓； 戎瑞雪； 丁家波； 张雷芳； 毛开荣； 王家鑫；

【机构】 河北农业大学动物科技学院免疫学系；

【摘要】 为探讨肥大细胞对猪布鲁菌S₂株的模式识别及活化效应,在体外骨髓来源的肥大细胞感染S₂株,收集不同时间的上清液,用ELISA法检测肥大细胞释放组胺、IFN-γ、IL-12的含量;激光共聚焦显微镜检查肥大细胞对S₂株的摄取状态;RT-PCR法观察S₂株感染后12h和24h肥大细胞TLR4和TLR8基因的m RNA的表达;流式细胞术观察S₂株感染后24h肥大细胞TLR4和TLR8蛋白的表达;瑞氏-姬姆萨染色法观察肥大细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞脱颗粒情况。感染S₂株的肥大细胞形态出现了明显的变化,S₂株感染后1h即出现明显的脱颗粒现象;S₂株感染后1 h,12 h肥大细胞上清中组胺含量明显高于正常对照组（P<0.05）,IFN-γ、IL-12未被检测到;共聚焦显微镜检查发现感染30min和1h S₂株主要黏附在肥大细胞表面,而未被肥大细胞摄入到细胞内;S₂株感染12 h后肥大细胞TLR4m RNA的表达明显高于正常对照组,24h时表达又减弱,S₂株感染24h时肥大细胞TLR4蛋白的表达和正常对照组相比增加了;S₂株感染12h和24h后肥大细胞TLR8m RNA和蛋白的表达没变化。S₂株能粘附在肥大细胞的表面并能激活肥大细胞,引起其脱颗粒,释放组胺,但在实验观察的时间点内未见IFN-γ和IL-12的分泌,其机制可能是S₂株通过TLR4被肥大细胞识别,且不能被肥大细胞摄取。更多还原