甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法的建立

【作者】 彭博； 房师松； 吕星； 王昕； 武伟华； 张仁利；

【机构】 深圳市疾病预防控制中心；

【摘要】 目的甲型流感在动物与人群中普遍存在,对两者的健康都会造成巨大的危害,历史上的数次流感大流行严重威胁了物种的生存。为快速诊断常见人兽共患流感亚型,本研究构建了一种可同时检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法。方法根据不同亚型流感HA与NA的差异,针对保守片段,使用软件设计相对的特异性引物及探针,构建合适的检测体系并分析其特异性、灵敏度、可重复性、在不同仪器上的适用性,并在同等条件下与常用检测试剂盒进行荧光值水平进行比对。结果本研究设计了五对引物及五条TaqMAN探针,成功构建了多重荧光RT-PCR检测体系,能同时检出甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒,检测灵敏度为10~1～10~2拷贝/μL,可重复性较好(变异系数为0.47%～4.03%),比常用检测试剂具有更高的荧光值水平(t=41.64,P<0.01),并可适用于多种常见的ABI 7500,ABI ViiA7,Stratagene Mx-3005p荧光定量PCR仪。结论本方法所构建体系具有较好的特异性、灵敏度、可重复性、仪器适用性,比市面上常见的季节性H1试剂盒具有更好的荧光值水平,并能减少试剂、耗材、人力及时间成本的消耗,非常适合于未来基层疾控中心及其他医疗单位进行流感亚型检测工作,并对可能出现的"熟面孔新型流感"、重配禽类流感起到一定程度上的提前预警作用。更多还原