let-7f通过调控RAB40C抑制胶质瘤细胞增殖的机制研究

【作者】 朱建新； 肖以磊； 李丽； 于福华； 刘伟； 孙明； 赵青菊；

【机构】 聊城市脑科医院神经外科； 聊城市人民医院中心实验室；

【摘要】 目的检测let-7f在人胶质瘤细胞系中的表达情况及对细胞增殖的影响,探讨靶基因RAB40C参与let-7f调节胶质瘤细胞增殖的作用机制。方法 RT-qPCR方法检测let-7f在胶质瘤细胞系中的表达情况;将let-7fmimics和let-7f inhibitor瞬时转染入胶质瘤细胞系U251、SHG-44,观察干扰和过表达let-7f对胶质瘤细胞增值的影响;通过microRNAs、Targetscan和miRBase等数据库搜索let-7f的下游目标靶基因,应用双荧光素酶报告系统进行验证,运用RNA干扰技术,沉默靶基因在mRNA和蛋白水平的表达,通过CCK-8法和软琼脂集落形成试验检测let-7f是否通过下调靶基因来调节细胞增殖。结果 let-7f在胶质瘤细胞在胶质瘤细胞系U251、SHG-44、A172、U138、T98G的表达水平明显低于正常星型细胞(P<0.01);胶质瘤细胞U251、 SHG-44转染let-7fmimics后的增殖能力比转染let-7fmimicsNC或未转染组明显降低,流式细胞仪检测显示G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少;RAB40C的3’UTR与let-7f存在潜在的结合位点,应用双荧光素酶报告系统验证RAB40C是let-7f的靶基因,RAB40CsiRNA与let-7fmimics共转染入U251、SHG-44细胞后,其细胞增殖率和软琼脂克隆形成率低于未转染组,但均显著高于let-7fmimics与RAB40CsiRNA NC共转染组及let-7fmimics单独转染组。结论 RAB40C是let-7f的靶基因之一,let-7f可通过调节RAB40C抑制胶质瘤细胞增殖,过表达let-7f及其靶基因可能为胶质瘤的治疗提供一种有效的新策略。更多还原