【作者】 李佳林； 王哲； 薄海； 张勇；

【机构】 天津体育学院天津市运动生理学与运动医学重点实验室；

【摘要】 目的:观察不同pH检测介质对大鼠腓肠肌和心肌线粒体呼吸速率的影响,探讨检测骨骼肌和心肌线粒体呼吸速率最适pH值环境及其实验技术方法。方法:选取8周龄雄性SD大鼠6只,禁食12h后断头颈处死,冰面迅速摘取心肌和分离双侧腓肠肌,在线粒体提取介质(KCl 1.2M/L,MgCl2.6H2O 0.05M/L,HEPES 0.2M/L,EGTA 0.001M/L,BSA 0.5%;pH 7.5)中将组织剪碎并研磨,研磨后的液体倒入预冷的离心管中。1000g离心10min,留上清,弃沉淀;10000g离心10min,弃上清,留沉淀;将线粒体沉淀吹悬于500μL保存介质(Sucrose 6M/L,HEPES 0.4M/L,EGTA 0.002M/L;pH 7.5)。配制线粒体呼吸检测介质(KCl 1.3M/L,HEPES 0.1M/L,EGTA 0.01M/L,KH2PO4 0.025M/L,BSA 0.15%),pH值分别调定为5.5,6.5,7.5和8.5。分别利用4种不同pH线粒体呼吸检测介质在Oxygraph-2k细胞呼吸测量仪中检测腓肠肌和心肌纯化线粒体在苹果酸+谷氨酸(M+G)/琥珀酸(Succinic,Suc)呼吸底物下的线粒体呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR)。结果:1.腓肠肌线粒体RCR结果,底物为M+G时,与pH5.5组相比,pH6.5组RCR显著升高(P<0.05);与pH6.5组相比,pH8.5组RCR显著降低(P<0.01);与pH7.5组相比,pH8.5组RCR显著降低(P<0.05)。底物为Suc时,与pH5.5组相比,pH6.5组RCR显著升高(P<0.01),pH7.5组RCR显著升高(P<0.01);与pH6.5组相比,pH8.5组RCR显著降低(P<0.05);与pH7.5组相比,pH8.5组RCR显著降低(P<0.05)。2.心肌线粒体RCR结果,底物为M+G时,与pH5.5组相比,pH6.5组RCR显著升高(P<0.05),pH7.5组RCR显著升高(P<0.05);与pH8.5组相比,pH6.5组RCR显著升高(P<0.05),pH7.5组RCR显著升高(P<0.01)。底物为Suc时,与pH5.5组相比,pH6.5组RCR显著升高(P<0.05),pH7.5组RCR显著升高(P<0.01);与pH6.5组相比,pH7.5组RCR显著升高(P<0.01);与pH7.5组相比,pH8.5组RCR显著降低(P<0.01)。结论:无论以M+G或Suc为底物,心肌线粒体呼吸检测最适pH值均高于骨骼肌,这可能与心肌更倾向于有氧代谢,乳酸含量较少相关。无论是骨骼肌或心肌,复合体II参与的线粒体呼吸检测最适pH值均高于复合体I。更多还原