下调赖氨酰氧化酶提高乏氧非小细胞肺癌顺铂敏感性的研究

【作者】 魏玲； 王兴武； 吕丽燕； 谢丽； 李洋； 宋现让；

【机构】 山东省肿瘤防治研究院；

【摘要】 目的观察下调赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对乏氧条件下人肺腺癌A549细胞顺铂敏感性的影响。方法构建靶向人LOX基因的干扰慢病毒载体(LV-LOX)和对照载体(LV-NC),转导人肺腺癌细胞A549,嘌呤霉素筛选建立稳定沉默细胞株A549/LOX(-)和对照细胞A549/NC。乏氧处理细胞24 h,实时荧光定量PCR和western blot方法分别检测LOX mRNA和蛋白表达,MTT方法评价细胞对化疗药物顺铂的敏感性,流式细胞术Annexin V-FITC+PI方法检测细胞凋亡,western blot方法分析细胞AKT和磷酸化AKT(ser473)蛋白表达。裸鼠皮下移植瘤模型观察A549/LOX(-)和对照A549/NC细胞体内生长差异及对腹腔注射顺铂的敏感性。结果与对照A549/NC细胞相比,筛选的LOX基因稳定沉默A549/LOX(-)细胞LOX mRNA和蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。MTT结果显示,A549/LOX(-)细胞乏氧条件下对顺铂的敏感性高于对照A549/NC细胞,提示LOX表达下调增加乏氧肺癌细胞的顺铂敏感性。而且,下调LOX表达增加乏氧条件下顺铂引发的细胞凋亡并下调P-AKT(ser473)表达水平。裸鼠体内实验结果显示,A549/LOX(-)细胞体内生长速度明显低于对照A549/NC细胞,腹腔注射顺铂对A549/NC和A549/LOX(-)移植瘤生长均有抑制作用,在A549/LOX(-)组抑制作用尤其显著,提示抑制LOX表达增加肺癌细胞对顺铂的敏感性。结论下调LOX表达可提高乏氧肺癌细胞对顺铂的敏感性并促进顺铂诱导的凋亡,本研究为LOX成为乏氧肺癌细胞化疗敏感性的治疗靶点提供了实验依据。更多还原