FEN1参与三阴性乳腺癌细胞对三氧化二砷敏感性的机制研究

【作者】 辛星； 温倜； 宫丽宝； 徐璐； 周璐； 冯晶； 车晓芳； 侯科左； 时莎； 石晶； 曲秀娟； 刘云鹏； 滕月娥；

【机构】 中国医科大学附属第一医院肿瘤内科；

【摘要】 目的乳腺癌目前是威胁女性身心健康的最常见肿瘤,尽管随着手术、化疗、放疗、内分泌等治疗水平的提高,乳腺癌的5年生存率高达约70%,但乳腺癌仍旧是女性导致死亡的主要原因,与其他亚型乳腺癌相比,三阴性乳腺癌更常见于40岁以下的女性,预后较差,探索新的、有效的治疗方法,对改善乳腺癌的疾病转归有着重要意义。现已证明多种药物可通过增加细胞活性氧水平而选择性的杀伤肿瘤细胞,三氧化二砷已明确可在多种肿瘤细胞中引起ROS增加,然而其三阴性乳腺癌中的作用尚不明确。为探索治疗TNBC的新方法,本研究主要应用三阴性乳腺癌细胞系研究三氧化二砷的抗肿瘤活性、作用机理以及FEN1在其中的作用。方法利用MTT法测定细胞增值能力,并计算药物IC50。利用Invitrogen^TMH2DCFDA检测细胞内活性氧。利用eBioscienceTMAnnexin V-FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡。利用ACTIVE MOTIFTM试剂盒提取细胞内核蛋白。利用Western blotting检测BAX、BCL-2、PARP、γH2AX、FEN1、p-P38、P38、p-JNK、JNK、NRF2、LAMIN A/C、ACTIN。利用免疫荧光技术检测γH2AX蛋白表达情况。利用Lipofectamine 2000试剂进行瞬时转染FEN1的siRNA转染。动物实验建立乳腺癌原位成瘤模型,研究抑制FEN1表达影响乳腺癌原位成瘤病灶对三氧化二砷的敏感性。利用Invitrogen^TM试剂检测细胞内GSH量。结果三氧化二砷以时间和剂量依赖的方式抑制三阴性乳腺癌细胞生长。给予三阴性乳腺癌细胞低浓度三氧化二砷可诱导ROS生成进而导致细胞凋亡及DNA损伤增加。ATO可使三阴性乳腺癌细胞FEN1表达上调,抑制FEN1使得细胞及成瘤小鼠对ATO敏感性增加。三阴性乳腺癌细胞中抑制FEN1表达增敏低浓度ATO是通过诱导ROS和细胞凋亡坏死实现。三阴性乳腺癌细胞中抑制FEN1表达可增加三氧化二砷通过诱导ROS导致的P38/JNK激活及细胞凋亡。三阴性乳腺癌细胞中降低FEN1表达可加强ATO对GSH的抑制进而导致ROS增加。结论抑制FEN1表达可通过降低Nrf2入核使得细胞内GSH降低、ROS生成增加而提高P38及JNK磷酸化水平及DNA损伤水平从而提高三阴性乳腺癌细胞对三氧化二砷敏感性。更多还原