多基因编辑与多基因联合干预

【作者】 唐冬生； 严爱芬； 刘连； 冯娟； 冯翠兰；

【机构】 佛山科技学院医学院；

【摘要】 I.问题的提出:靶向药物治疗十分有效,但靶向药物的数量实在太少。既然针对靶点的靶向药物有效,那么针对靶点基因的干预治疗也将有效,多基因靶向干预也将更加有效。本研究旨在寻找高表达位点、安全靶位点,建立高效基因定点插入技术。II.高表达安全位点:研究发现插入到r DNA基因的的间隔序列(ITS)的外源基因能够随着细胞的分裂稳定遗传给子代细胞,并能够稳定表达。III.高效基因定点插入技术:建立了以ITS为靶位点的多位点基因打靶技术,效率从10-6提高到15%,锌指核酸酶(ZFN)介导的基因编辑技术效率提升到23%,CRISPR/Cas9介导的高效基因编辑技术效率再提高到65%,TALEN介导的高效基因编辑技术效率又提高到78%。通过E-cadherin,Bmi-1和Endostatin基因与鼻咽癌转移复发的研究,发现多基因干预比单基因干预更能显著降低细胞侵袭能力和迁移能力等。IV.结论:ITS——基因定点插入的理想位点,外源基因稳定表达,克服了毒性整合等安全性问题。ZFN、TALEN、CRISP/Cas9介导多基因编辑大大提高了基因定点插入的效率。更多还原