基因Ran与杀虫剂应激响应的初步研究

【作者】 柏骞； 陈露； 刘雅慧； 程罗根；

【机构】 南京师范大学；

【摘要】 Ran (Ras-related nuclear protein)蛋白,是细胞中含量最丰富的小G蛋白,它可介导参与调控细胞周期中各个时期的许多细胞生命活动,通常哺乳动物细胞中只有一种Ran蛋白,酵母中有两种,果蝇中有3种Ran的同源物。本文以黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)Kc细胞为实验材料,采用荧光定量、免疫印迹、细胞转染、RNAi、流式细胞术等实验技术为手段,着力探讨了在不同种类杀虫剂(DDT、对硫磷、西维因、多杀菌素)胁迫下基因Ran的响应情况以及基因Ran的功能和细胞耐受杀虫剂胁迫程度的关系。荧光定量结果显示细胞基因Ran对4种杀虫剂均有不同程度的响应,这暗示Ran可能在多种杀虫剂耐受过程扮演有重要角色。细胞转染结果表明,转染重组质粒24小时,细胞中Ran的表达量显著升高。加入杀虫剂(DDT和对硫磷)胁迫24小时,Ran的表达水平较对照上调3.15和2.46倍;转染dsRNA 24小时,基因Ran表达量显著下调,但加入杀虫剂(DDT和对硫磷)胁迫细胞24小时,基因Ran逐渐恢复表达,其表达较对照分别上调1.61和1.15倍。此外,流式细胞分析显示,40ppm对硫磷诱导24小时,细胞凋亡率最低(16.7%)。而转染重组质粒,细胞死亡率降低;转染dsRNA,死亡率明显提高。这暗示了基因Ran可以有效的抵抗不良环境的应激,对细胞具有一定的保护作用。综合上述的实验结果,我们认为Ran参与多种杀虫剂的应激反应,进而参与杀虫剂耐受性的形成,但是相关机理尚需进一步研究。更多还原