果蝇蛋白酶体α6亚基的克隆及其与溴氰菊酯应激关系的研究

【作者】 胡俊丽； 英晓丽； 程罗根；

【机构】 南京师范大学；

【摘要】 通过前期的研究工作发现,小菜蛾溴氰菊酯抗性品系与敏感品系相比,泛素(ubiquitin)和蛋白酶体亚基6(prosalpha6)的表达水平显著提高,小菜蛾泛素基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)以及黒腹果蝇细胞中泛素基因过表达结果均证明泛素基因的表达水平与小菜蛾対溴氰菊酯的应激相关,但是prosalpha6与溴氰菊酯应激的关系还没有研究报道。为了探究prosalpha6与溴氰菊酯应激的关系以及在溴氰菊酯抗性中的作用,本研究以黒腹果蝇作为模式生物,采用异源表达、RNAi、毒力测定等实验方法探索prosalpha6表达量变化对果蝇细胞耐受溴氰菊酯水平以及小菜蛾对溴氰菊酯抗性水平的影响。dsRNA敲低prosalpha6在果蝇细胞内的表达之后,用不同浓度的溴氰菊酯处理果蝇Kc细胞24 h,CCK-8试剂盒进行细胞毒性检测。结果显示,干扰组细胞对溴氰菊酯药物的敏感性明显增强;将外源prosalpha6转染到果蝇Kc并稳定过表达后,在一系列不同浓度的溴氰菊酯药物胁迫下,转染组细胞的存活率相对于对照组细胞都有明显升高;蛋白酶体抑制剂MG-132预处理Kc细胞6h后,再用不同浓度的溴氰菊酯处理细胞,结果发现蛋白酶体活性被抑制后普遍提高了果蝇细胞对溴氰菊酯药物的敏感性;蛋白酶体抑制剂MG-132预处理抗性品系小菜蛾幼虫24 h后进行溴氰菊酯药物毒力测定实验,结果发现蛋白酶体抑制剂MG-132的处理使抗性品系小菜蛾幼虫对溴氰菊酯的LC50的值被显著下调。上述结果表明:基因prosalpha6与溴氰菊酯应激反应存在一定的相关性,prosalpha6的过表达对果蝇细胞应激外界溴氰菊酯胁迫起到一定的保护作用,prosalpha6可能是与抗性相关的候选基因。更多还原