C4植物PEPCase单克隆抗体的制备与ELISA检测方法的建立

【作者】 张斌； 张启军； 廖慧敏； 秦海龙； 宗寿余； 夏士健； 吕川根；

【机构】 南京农业大学农学院； 江苏省农业科学院粮食作物研究所；

【摘要】 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase, PEPCase)是高等植物尤其是C4植物进行光合作用的一种关键酶,利用该基因来提高C3植物的光合效率具有重要的应用价值。本研究利用来源于玉米的PEPCase免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经筛选克隆,得到3株能稳定分泌抗PEPCase的单克隆抗体杂交瘤细胞,并制备腹水型单抗。利用其中一株杂交瘤细胞株4E5的小鼠腹水单抗和兔源多抗,建立了检测PEPCase的多抗-待检样品-单抗的双夹心酶联免疫吸附剂测定方法(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA),整个操作过程仅需5h(不含包被与封闭)。利用建立的双夹心ELISA方法检测转玉米PEPC基因水稻,效果良好,这为育种上快速筛选转PEPC基因作物提供了一种更简单、快速、灵敏的检测方法。更多还原