poly(I:C)上调Myc基因表达促进肠道干细胞增殖

【作者】 曾慧红； 唐家辉； 乐梦真； 朱清仙； 邵立健；

【机构】 南昌大学医学院；

【摘要】 目的众所周知,双链RNA(dsRNA)可直接导致肠绒毛损伤,引起严重腹泻,TLR3信号通路激活参与此过程调节。但是,肠道干细胞在该病理学过程中的作用目前尚不清楚。本研究采用Poly(I:C)模拟病毒双链RNA,建立肠道损伤模型,探讨急性和慢性poly(I:C)处理致肠道损伤中肠道干细胞的变化及可能机制。方法 8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为三组:正常对照组,急性处理组,慢性处理组。急性处理组小鼠仅腹腔注射一次poly(I:C)(10μg/g,n=10);慢性处理组小鼠每9天腹腔注射一次poly(I:C)(10μg/g,n=10),共5次;正常对照组小鼠注射等量生理盐水(n=5)。各组小鼠于最后一次注射poly (I:C)后48小时取空肠,取材前2小时注射Brdu(100 mg/kg)。采用HE染色观察空肠组织病理学变化,免疫组织化学染色观察肠道干细胞、Brdu+增殖细胞及潘氏细胞数量变化,TUNEL染色检测小肠腺细胞凋亡情况,嗜银染色检测小肠内分泌细胞,PAS染色检测杯状细胞,并采用qRT-PCR检测肠道干细胞中细胞周期、细胞凋亡、Wnt信号通路、Stat1信号通路和Notch信号通路相关基因的变化。结果与对照组相比,急性poly(I:C)处理48小时后,肠绒毛高度缩短,而慢性poly(I:C)处理后空肠绒毛高度及肠隐窝深度均增加。急性和慢性poly(I:C)处理后小肠肠道干细胞及小肠腺Brdu增殖细胞及内分泌细胞均明显增多,表明poly(I:C)处理后小肠干细胞具有更强的向肠道内分泌细胞分化的能力;TUNEL检测显示急性和慢性poly(I:C)处理后小肠腺凋亡细胞也明显增多。qRT-PCR结果显示,poly (I:C)处理可上调肠道干细胞Stat1、Axin2、Myc和Bcl2基因的表达,抑制Hes1基因表达。结论双链RNA暴露后可促进肠道干细胞快速增殖和分化,以进一步缓解双链RNA导致的肠道损伤,并通过上调Myc基因表达来介导。更多还原