利用酵母双杂交技术筛选中间偃麦草天冬氨酸蛋白酶TiAP1的互作蛋白

【作者】 杨艳琳； 原斌杰； 王洪刚； 封德顺；

【机构】 山东农业大学农学院； 作物生物学国家重点实验室；

【摘要】 天冬氨酸蛋白酶(aspartic proteinase)广泛分布于真核生物以及微生物中,参与机体的新陈代谢及生物调控作用,如蛋白质加工降解、生物和非生物胁迫、衰老和程序性细胞死亡。前期研究中,我们获得了来自中间偃麦草的天冬氨酸蛋白基因TiAP1,通过体外抗菌实验和转基因研究表明,该基因有抗小麦白粉病的作用;进一步通过Gateway重组技术,在酵母菌株Y187中构建了白粉病菌诱导的小麦YN15和小偃麦SN6306苗期cDNA文库,质量检测表明库容量达到1.6×107CFU,文库滴度4.6×10CFU/mL,符合建库要求;通过构建重组诱饵载体(pGBKT7-TiAP1)转化酵母菌株Y2Hgold,检测诱饵载体的毒性与自激活能力,利用该文库筛选TiAP1的互作蛋白,初步研究表明TiAP1可能与白粉病菌60S核糖体蛋白亚基、小麦WRKY70和钙调素蛋白等存在相互作用;将筛选的来自白粉病菌的60S核糖体蛋白亚基与TiAP1通过酵母双杂交再次验证,进一步发现白粉病菌的60S核糖体蛋白亚基与TiAP1互作,这表明TiAP1在一定程度能够抵御白粉病的入侵可能是由于TiAP1与白粉病菌的60S核糖体蛋白亚基蛋白的互作影响了白粉病菌的孢子的萌发。这为阐明小麦TiAP1的抗病性机理奠定了基础。更多还原