养殖中华鳖蜡样芽孢杆菌的分离、鉴定和致病性研究

【作者】 孟庆珍； 尹飞； 傅超英； 陈凡； 刘长军； 袁娜； 王力； 张鸿鹄； 钱冬；

【机构】 宁波大学海洋学院； 浙江省杭州市水产技术推广总站； 浙江省象山县海洋与渔业局；

【摘要】 2016年夏杭州某中华鳖养殖场出现大量发病,病鳖呈厌食、反应迟钝、四肢无力、池边独游、濒死前不停摇头等病症,死亡率20%以上。用营养琼脂从典型症状濒死中华鳖分离到革兰阳性短杆状,芽孢近中生或中生;API50CHB对分离菌株T91-1鉴定显示与蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）参考菌株ATCC14579 97.4%相似;T91-116S rDNA和gyrB基因序列与ATCC14579相似度为99%,确认T91-1为蜡样芽孢杆菌。T91-1在羊血平板呈典型β溶血,牛奶平板上出现明显透明圈,表明存在溶血性和胞外蛋白酶类毒素。用T91-1肌肉注射感染健康中华鳖LD₅₀为4.91×10⁵CFU/ind,,死亡鳖出现与自然发病鳖类似症状;感染发病中华鳖血和肝印/涂片瑞氏-姬姆萨染色可见组织间隙有大量芽孢杆菌。自然发病鳖肾、肝、肺、心病理切片可见大量芽孢杆菌,病鳖血管扩张充血,嗜酸性粒细胞浸润。T91-1灌胃ICR乳鼠3d后可全部死亡,死亡鼠呈皮下出血等症状;T91-1腹腔注射和灌胃ICR 4周龄小鼠12-24 h可出现迟钝、厌食等症状,1周内未出现死亡。上述结果表明蜡样芽孢杆菌对中华鳖有很强毒力,对小鼠有较强肠毒性,是引起本次杭州中华鳖暴发性疾病的病原。更多还原