消胀贴膏浸膏液调节Cajal间质细胞SCF/c-kit信号通路的作用机制

【作者】 赵强； 邢枫； 陶艳艳； 刘成海；

【机构】 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所； 上海市中医临床重点实验室；

【摘要】 目的:探讨消胀贴膏浸膏液调节Cajal间质细胞SCF/c-kit信号通路的作用机制。方法:新生C57BL/6乳鼠20只,3d处死,无菌条件下分离空肠组织并分离原代Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)。光学显微镜下观察细胞形态、流式细胞术鉴定ICCs纯度。细胞分为6组:空白组,Imatinb组,Imatinib+消胀贴膏浸膏液组,Imatinib+干细胞因子(stem cell factor,SCF)组,消胀贴膏浸膏组和SCF组。CCK-8检测细胞活力:全细胞膜片钳技术测定细胞动作电位、细胞内K+和Na+离子通道电位变化:蛋白印迹法检测SCF/c-kit信号通路及其下游的关键信号分子c-kit、Akt、Stat3、Erk1/2及其磷酸化表达。结果:流式鉴定ICCs纯度约为85%。经SCF刺激后ICCs的活性明显增加,其中以100ng/ml的浓度组细胞活力增加较显著;Imatinib可显著抑制ICCs的活力,其中100μM浓度的Imatinib抑制作用最为显著;消胀贴膏浸膏液0.1-50ng/ml的浓度下对ICCs的活力无明显影响。与空白组比较,100μM浓度的Imatinib可明显抑制ICGs的活力;消胀贴青浸膏液或者SCF与Imatinib联用后ICGs的活力均明显增强;消胀贴膏浸膏液对ICCs的活力无明显影响:SCF可明显增强ICCs的活力。电生理实验结果显示,与空白组相比,Imatinib可显著抑制ICCs细胞膜上Na+和K+通道的电流:消胀贴膏或SCF与Imatinib联用可以减少Imatinib对ICCs Na+和K+电流的抑制作用;单纯消胀贴膏或SCF均可显著增强ICCs内向Na+和K+电流。蛋白印迹结果显示,与空白组相比,Imatinib可明显抑制ICCs c-kit蛋白的表达,同时抑制Akt、Stat3和Erk1/2蛋白的磷酸化;消胀贴膏或SCF均能明显逆转Imatinib对c-kit表达以及Akt、Stat3和Erk1/2的磷酸化的抑制;此外,与空白组相比,消胀贴和SCF均可显著增强c-kit的表达,同时促进Akt、Stat3和Erk1/2的磷酸化。结论:消胀贴膏浸膏液通过增强ICCs细胞膜NA+和K+通道的电流、调节SCF/c-kit信号通路进而促进ICCs功能。更多还原