獭兔皮肤中黑色素沉积规律及相关基因表达分析

【作者】 胡帅帅； 陈阳； 赵博昊； 杨乃苏； 王曼曼； 肖叶懿； 鲍国连； 吴信生；

【机构】 扬州大学动物科学与技术学院； 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所；

【摘要】 本试验检测了不同毛色獭兔皮肤组织中黑色素沉积规律,以及黑色素生成相关基因MITF、KIT和TYR的表达量,进行关联性分析,以期明晰彩色獭兔皮肤黑色素沉积规律,以及MITF、KIT和TYR基因在毛色形成中的作用,为毛皮动物的毛色形成机制提供一定的理论基础。试验选取90日龄黑色、青紫蓝色、海狸色、蛋白青色、蛋白黄色及白色獭兔各3只,采集背部皮肤,制作石蜡切片,通过HE染色观察毛囊生长情况,黑色素染色观察黑色素沉积情况;利用NaOH法提取皮肤组织中黑色素检测黑色素含量;qRT-PCR及全自动蛋白检测系统Wes技术检测不同毛色獭兔皮肤组织中黑色素相关基因MITF、KIT和TYR的mRNA表达量及蛋白表达量,并对黑色素含量与基因的mRNA表达量和蛋白表达量分别进行关联分析,探究彩色獭兔皮肤黑色素沉积规律。结果表明:通过石蜡切片发现,不同毛色獭兔皮肤组织中,皮肤表皮层和真皮层区分明显,毛囊均分布在皮肤的真皮层,每个毛囊群中都存在初级毛囊和次级毛囊,并且毛囊中有黑色素颗粒的存在;利用酶标仪检测黑色素在A₅₀₀处的吸光值,统计分析黑色素浓度,发现不同毛色獭兔皮肤组织中黑色素含量差异显著,黑色皮肤组织中黑色素含量最高,显著高于海狸色、蛋白青色、蛋白黄色及白色皮肤组织（P<0.05）,但与青紫蓝色皮肤组织差异不显著（P>0.05）。通过荧光定量技术检测黑色素生成相关基因MITF、KIT和TYR在不同毛色皮肤组织中的表达量,发现这些基因在黑色皮肤组织中的表达量显著高于其它毛色,在白色皮肤组织中表达量最低。通过Wes技术检测了MITF、KIT和TYR在不同毛色皮肤组织中的蛋白表达水平,发现在不同毛色皮肤组织中均表达,在黑色皮肤组织中的表达量显著高于其它毛色。关联性分析发现MITF和KIT的mRNA表达量和黑色素含量呈现显著正相关（P<0.05）,MITF的蛋白表达量和黑色素含量呈极显著正相关（P<0.01）。结论:不同毛色獭兔皮肤中黑色素含量及毛色表型基本一致,且MITF、KIT和TYR基因均在黑色皮肤组织中的表达水平最高,表明这些基因与黑色素的形成有关,研究结果为毛皮动物的毛色形成机制奠定一定基础。更多还原