不同部位和发育阶段的冬虫夏草繁育品总糖、?-1,3葡聚糖含量和刺激Dectin-1活性分析

【作者】 冯慧琴； 钱正明； 吴君； 衣琴； 李文佳； 杨晓彤；

【机构】 上海师范大学生命与环境科学学院； 广东东阳光药业有限公司；

【摘要】 冬虫夏草是一种名贵的补益类中药,中国药典记载其功能和主治为"补肾益肺,止血化痰。用于肾虚精亏,阳痿遗精,腰膝酸痛,久咳虚喘,老嗽咳血"。这种中药是由冬虫夏草菌(Ophiocordyceps sinensis)侵染蝙蝠蛾幼虫后形成的菌核和子座的复合体,过去只在青藏高原才有野生资源分布,数量非常有限,而现在广东东阳光药业有限公司已能在模拟的生态环境中大规模培养冬虫夏草繁育品。多糖是冬虫夏草的主要活性成分,具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗氧化等多种活性,而其中的?-(1,3)葡聚糖不仅是真菌细胞壁的成分,更是免疫活性多糖的核心结构,能刺激Dectin-1等免疫受体,引发先天免疫反应。本研究中,我们用冬虫夏草繁育品为材料研究了不同发育阶段及子座、菌核和全草中总糖、?-1,3葡聚糖的含量,以及刺激Dectin-1的活性。冬虫夏草繁育品先经粉碎并过3号药筛,粉末用盐酸水解,水解物中的总糖用苯酚-硫酸法测定,?-1,3葡聚糖含量用β-1,3葡聚糖酶法测定。刺激Dectin-1受体活性采用HEK-Blue hDectin-1b细胞系进行。结果显示,未侵染的蝙蝠蛾幼虫中总糖含量为20.63±1.13%,侵染后的僵虫为25.19±0.22%,子座刚形成时为28.19±0.09%,到子座形成子囊壳前时为30.05±0.50%,形成子囊鞘后含量为34.13±0.57%。总糖含量随虫草的发育呈现递增关系。?-1,3葡聚糖含量测定也得到了相似的结果。在幼虫、僵虫、子座刚形成、子囊鞘形成前后的繁育品中,β-1,3葡聚糖含量分别是2.56±0.14%,4.65±0.11%,12.89±0.43%,15.51±0.69%和16.89±0.43%。形成子座后的虫草与僵虫比较,?-1,3葡聚糖含量均有极显著增加(p<0.001)。对不同部位的含量分析显示,子座、菌核及全草中的总糖含量分别为28.12±2.45%、28.23±1.11%和27.34±1.60%;?-1,3葡聚糖含量分别为13.09±1.95%、13.88±0.74%和13.16±1.09%,差异并不显著(p>0.05)。用HEK-Blue-hDectin-1b细胞系检测繁育品刺激Dectin-1的活性,结果发现不同发育阶段的繁育品均能显著激活dectin-1受体,刺激活性随发育的进程逐渐增高,最高(子囊鞘形成前)可达幼虫的4倍,但形成子囊鞘后活性反而比未形成时下降了近20%(p<0.05)。子座和菌核虽总糖和葡聚糖含量接近,但激活dectin-1受体的能力有差别,菌核的刺激活性是子座的两倍(p<0.05)。全草的刺激活性介于两者之间,活性约是菌核的83%。结论:随发育进行,冬虫夏草繁育品的?-1,3葡聚糖、总糖含量和刺激Dectin-1的活性逐渐递增,但形成子囊鞘后刺激Dectin-1的活性有所下降。冬虫夏草繁育品的子座和菌核中?-1,3葡聚糖、总糖含量接近,但菌核比子座具有更强的刺激活性,提示两个部位的多糖虽含量接近,但结构和活性有差异。更多还原