人源性巨噬细胞体外模型的建立与验证

【作者】 徐淼； 杨辉； 张立实； 贾旭东；

【机构】 四川大学华西公共卫生学院食品安全监测与风险评估四川省重点实验室； 国家食品安全风险评估中心；

【摘要】 目的巨噬细胞具有异质性和多样性,参与固有免疫和获得性免疫,可通过细胞因子、趋化因子募集免疫细胞,其代谢和功能改变对宿主防御反应、组织稳态和修复具有重要意义。本研究旨在建立人源性巨噬细胞体外模型,验证其功能特征,为研究具有潜在的干扰能量代谢作用的食品污染物提供实验材料。材料与方法利用人源性单核细胞白血病细胞THP-1,以佛波酯（phorbol myristate acetate,PMA）25ng/ml刺激48小时,随后去除PMA休息24小时,获得未激活的、处于稳定状态的巨噬细胞（M0）。以干扰素-γ（Interferon-γ,INF-γ）25 ng·mL^-1加脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）100 ng·mL^-1或白介素-4（Interleukin-4,IL-4）20 ng·mL^-1加白介素-13（Interleukin-13,IL-13）25 ng·mL^-1分别处理M0细胞24小时,获得M1或M2型巨噬细胞。通过观察不同细胞的形态学特征,采用流式细胞术检测细胞表面标志物（CD14、CD11b、CD163、CD206、CD209、CD369、HLA-DR）,实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞特征性基因（KLF4、IL-10）表达水平来鉴定诱导激活后的细胞。为研究M1、M2型巨噬细胞脂质代谢特征,采用定量PCR检测FABP4基因表达,采用流式细胞术检测CD36表达;通过特异性激动剂罗格列酮（Rosiglitazone）、抑制剂T0070907,研究PPARγ对细胞分化及CD36表达的影响。结果 M0与THP-1细胞在细胞表面标志物CD11b的表达上显著不同,在M0细胞显著升高;M1型巨噬细胞高表达人类白细胞DR抗原（HLA-DR）细胞表面标志物;M2型巨噬细胞CD209、KLF4、IL-10的表达显著高于M1型巨噬细胞。THP-1诱导为巨噬细胞后脂肪酸摄取相关分子FABP4、CD36表达显著升高,在激活状态的巨噬细胞（M1、M2）表达显著高于稳定状态的M0巨噬细胞,且M2巨噬细胞表达略强于M1巨噬细胞。PPARγ激活显著抑制M2型巨噬细胞分化,反之则显著促进M2分化。不同巨噬细胞PPARγ激活后CD36表达均显著升高,且M2型巨噬细胞反应强于M1型;PPARγ抑制后M0、M2型巨噬细胞CD36表达显著降低。结论利用THP-1体外诱导的人源性巨噬细胞具有相应的形态特征、表面标志物,同时脂质摄取相关基因FABP4、CD36高表达,且受PPARγ调控,因此具有用于体外脂质代谢研究的潜力。更多还原