SiO₂致RLE-6TN肺泡上皮细胞活力和缝隙连接通讯功能的影响

【作者】 薄存香； 张玉； 贾强； 赛林霖； 邵华； 杜忠君；

【机构】 山东省职业卫生与职业病防治研究院；

【摘要】 目的探讨SiO₂对RLE-6TN肺泡上皮细胞活力及缝隙连接通讯（gap junctional intercellular communication,GJIC）功能的影响。方法采用CCK-8检测细胞的存活率。取对数生长期的细胞接种于96孔板,调整细胞密度为5×10⁴个/孔。培养24小时后,加入含不同浓度SiO₂（25,50,100,150ug/ml）的DMEM培养液200ul/孔,培养24小时后,加入CCK-8试剂,酶标仪检测450nm处各孔OD值,每组设3个复孔,重复3次。细胞GJIC功能测定采用划痕标记染料示踪技术（SLDT）。将细胞接种于直径35mm的培养皿中,细胞长成融合单层后换入含不同浓度SiO₂（25,50,100ug/m1）DEME培养液。染毒6h后,以37℃的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）冲洗细胞3次,加入预温的质量浓度为0.05%的LY2 ml,用锋利的手术刀片轻划细胞层,标记3分钟,吸出LY,用磷酸盐缓冲液冲洗细胞3次,加入pH 7.0磷酸盐缓冲甲醛液固定,显微镜下观察荧光传递情况。每个浓度组设3个平行皿,每皿平行划痕5次,选择划痕较平滑处计数带有荧光的细胞层数。荧光局限于划痕边缘的单层细胞判为未传递（-）,1～2层细胞有荧光为（+）,2～3层细胞有荧光为（++）,3～4层细胞有荧光为（+++）,4～5层细胞有荧光为（++++）,5层以上细胞有荧光为（+++++）。将每处划痕的观察结果（-）～（+++++）量化为0～5,然后计算各组16～20处划痕的平均值。所有数据采用SPSS 16.0进行统计分析。结果细胞存活率随SiO₂浓度增高而降低,100,150ug/l（分别为92.47±1.46,80.63±1.72,%）浓度组细胞存活率显著低于对照组（100.13±0.51,%）,差异有统计学差异（P<0.01）。LY荧光染料沿划痕边缘垂直扩散的距离随处理浓度的增加而缩短,50,100ugh/ml（分别为2.28±1.07,1.63±0.89）浓度组与对照组（3.00±1.03）比差异有统计学意义（P<0.01）。结论 GJIC功能抑制可能在SiO2致矽肺肺纤维化过程中起一定作用。更多还原