一株桑树内生拮抗菌的分离、鉴定及发酵条件的优化

【作者】 方翔； 徐伟芳； 牛娜； 左伟东； 谢洁；

【机构】 家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院； 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心；

【摘要】 桑椹菌核病是由核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum）等病原真菌引起的果桑主要病害。为寻获对菌核病病原具拮抗活性的内生细菌,本研究釆用组织分离培养法和抑菌圈法分离筛选菌核病拮抗性内生细菌,根据形态、培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列系统发育分析对抑菌活性显著且稳定的菌株进行菌种鉴定;进而利用菌丝生长速率法检测其抑菌谱与热稳定性,并通过单因素实验和正交试验优化该菌株产生抑菌活性物质的发酵条件。结果显示,从桑树中共分离到55株内生细菌,其中XP-27菌株对核盘菌的抑菌活性稳定且拮抗效果明显;菌株XP-27形态、培养特征、生理生化特性与芽孢杆菌属相符,基于16S rDNA序列的系统发育分析结果显示该菌株与登录号为NR116240甲基营养型芽孢杆菌处于同一最小分支,故将XP-27菌株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）,命名为B.methylotrophicus XP-27;抑菌谱与热稳定性实验结果表明XP-27菌株对灰霉菌、腐霉菌等十种常见植物病原菌具不同程度的抑制作用,且其发酵滤液热稳定性强;发酵条件优化结果表明该菌株最佳培养基配方与培养条件为:牛肉膏1.0%,淀粉1.5%,K₂HPO₄ 0.05%,MgSO₄·7H₂O 0.10%,最佳培养温度为30‵,接种量为7%,初始pH值为8.0。筛选获得的桑树内生细菌B.methylotrophicus XP-27对桑椹菌核病病菌核盘菌具有显著拮抗作用,是进一步开发桑椹菌核病生防制剂较为理想的候选菌株。更多还原