桑枝萃取物对红色毛癣菌的抑菌活性及其主要物质基础

【作者】 逯海朋； 贾亚楠； 喻艳； 乐梦婷； 孙思龙； 徐立；

【机构】 西南大学生物技术学院；

【摘要】 【目的】研究桑枝提取物对红色毛癣菌的抑制活性,揭示其抑菌功效的物质基础,为利用桑枝开发治疗足癣的生物制剂提供理论参考依据,也为临床治疗真菌感染提供实验依据。【方法】利用75%的乙醇对桑枝条进行超声提取,浸膏再经不同极性溶剂萃取分段,萃取液经低温低压浓缩;以红色毛癣菌为试验菌种,以抗生素-硝酸益康唑(Miconazole nitrate,MN)为阳性对照,采用96孔板-MTT比色法测定了桑枝总提取物及不同极性溶剂萃取物的抑菌活性,并在活性跟踪下通过多次聚酰胺柱层析、硅胶柱层析及薄层层析法,对桑枝条中抑制红色毛癣菌的最主要的活性成分进行分离纯化;将分离得到的化合物以氘代二甲亚砜为溶剂,利用MS(质谱)及NMR(核磁共振)技术进行波谱测定及结构分析鉴定;利用HPLC检测分离纯化所得活性单体化合物在活性萃取分段中的含量,再结合萃取分段与活性单体对红色毛癣菌的抑制活性随浓度的变化曲线,再将活性单体对红色毛癣菌的抑制率应用SPSS软件进行Probit回归分析,并将浓度进行"Log Base 10"转换,得出其回归线性方程,评估化合物单体在抑制红色毛癣菌活性中的贡献度,进而确认所得活性单体是否为该活性分段中最主要的活性物质;同时利用96孔板-MTT比色法研究活性萃取分段及单体活性物质与MN联合使用的抑菌效果。【结果】乙酸乙酯萃取分段(ethylacetateextractsoftwig,TEE)对红色毛癣菌具有很好的抑菌活性,其MIC值为1.000mg·mL-1(抑制率为99.35%);在活性跟踪下,从TEE中分离鉴定出的抑菌活性物质单体鉴定为氧化白藜芦醇(oxyresveratrol,OXY),其对红色毛癣菌生长抑制的MIC值为0.500 mg·mL-1 (抑制率为98.69%),基于OXY的活性及其在TEE中的含量,得出OXY在TEE抑制红色毛癣菌活性中的贡献度为80.52%,确定其是桑枝中的主要抑菌活性物质;OXY与MN联合使用对红色毛癣菌的抑制作用具有协同效应,显著降低各自的MIC值。【结论】桑枝作为一种使用安全的植物资源,其乙酸乙酯萃取物可作为一种抗菌添加剂,也可开发成抗菌护肤品或保健品;OXY可用于辅助治疗一些由真菌感染所引起的疾病,特别是能和抗生素联用,来提高治疗效果,降低抗生素的使用量。更多还原